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制取抗体应采用什么方法原理?

阅读:1293          发布时间:2014-9-3

             
    抗体也是有着多种类型及不同种属的,制取抗体应采用什么方法原理?

    免疫细胞化学的技术关键之一是制备特异性强、亲合力大、滴度高的特异性抗体,由于每种抗原都有几个抗原决定簇,用它免疫动物将产生对各个决定簇的抗体,即多克隆抗体。单克隆抗体免疫球蛋白属同一类型,质地纯一,而且它是针对某一抗原决定簇的,因此特异性强,亲合性也一致。
    如何选择正确的抗体制备技术? 
    从分离到表达:不同的抗体重组技术可以用于制备不同的抗体,工业上和学术界都发展了许多相关的技术,噬菌体展示就是其中的主导技术。昆虫和哺乳动物细胞的表达系统从理论上而言是相似的,但是其它的分子进化类型需要重新提炼和分离抗体。
    
【抗血清质量的评价】
 1. 效价
    放射免疫法:以不同稀释度的抗血清与标记抗原混合,孵育24h后,测定其结合率。通常以结合率为50%的血清稀度和为效价。如某抗血清的结合率为50%时的稀释度为1:15000,则该血清的效价就是1:15000。抗血清的效价,除由抗血清本身的性质决定外,还受标记抗原的质量、孵育时间,所用稀释液的成分及其pH等因素的影响,在工作中必须引起注意。 
    双向扩散法:利用大分子抗原和抗体在琼脂平板上扩散,两者在相交处产生沉淀线,以观察和判断抗血清中是否有抗体及其浓度。
球脂板的制备:100ml pH7.1 的磷酸盐缓冲液加到15g的琼脂内,于水浴中加温,搅拌,使琼脂*溶解,趁热用纱布过滤,待溶液冷却到65℃左右时,加入叠氮钠,使其在溶液中的浓度为0.1%。用移液管把琼脂放在干净平皿或玻片上,约3mm厚,待其冷却,*凝固后,用打孔器打孔。中央孔内加适量抗原,周围各孔内分别加入50μl 1:2、1:4、1:8、1:16、1:32及不稀释的抗血清,37℃下孵育24h,观察有无沉淀线产生,以判断血清的稀释度。
      
 2. 特异性测定
    抗血清的特异性或称专一性是指抗血清对相应的抗原及近似的抗原物质的识别能力。特异性好就是抗血清的识别能力强。通常,特异性是以交叉反应率来表示的。交叉反应率低,表示抗血清的特异性好,反之则特异性差。交叉反应率一般是用竞争抑制曲线来判断的。以不同浓度的抗原和近似抗原物质分别做竞争抑制曲线,计算各自的结合率(B/T或B/B0),求出各自在IC50时的浓度,按下列公式计算交叉反应率。
S=y/Z×100%
S:交叉反应率,y:IC50时抗原浓度,Z:IC50时近似抗原物质的浓度。
如某抗原的IC50浓度为90Pg/管,而一些近似抗原物质IC50浓度几乎是无限大,可以说这一抗血清与其它抗原物质的交叉反应率近似零,即无交叉反应,该抗血清的特异性是好的。
    
 3. 亲合力
    在免疫学中,亲合力是指抗体与结合抗原体的活度或牢固度。抗体与抗原结合疏松,结合后会迅速解离,称为亲合力低,反之,亲合力高。亲合力的高低是由抗原分子的大小,抗体分子的结合位点与抗原的决定基之间的立体结构型的合适程度决定的。亲合力常以亲合常数K表示。K的单位是升/摩尔。在RIA中,K是该抗血清能达到的zui小检出量的倒数,K=1/[H],[H]是zui小检出量,通常,K的范围在108~1012L/mol之间,也有高达1014L/mol的。
计算亲合常数的方法20余种,计算出的K都不能真实反映实验情况,只能作为参考。
        

   上海恒远生物严把产品质量关,劣质的抗体使得实验的可靠性常常得不到很好的保证,所以加快生物科研试剂的创新和发展,全面提升科研试剂的质量,专业的销售和技术服务团队,迎得了国内外厂商的*,交流。

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