在微生物检验中，正确制备培养基是基础步骤之一。实验室使用各种基础成分制备培养基时，应按照配方准确配制，并记录相关信息。日前，上海恒远生物技术员分析出培养基制备流程，在这里分享给大家：

一、水

    实验用水的电导率在25℃时不应超过25μS/cm(相当于电阻率≥0.4ΜΩcm)，除非另有规定要求。

    水的微生物污染不应超过103 CFU/mL。应按GB 4789.2，采用平板计数琼脂培养基，在36℃±1℃培养48h±2h进行定期检查微生物污染。

二、称重和溶解

    小心称量所需量的脱水合成培养基(必要时佩戴口罩或在通风柜中操作，以防吸入含有有毒物质的培养基粉末)，先加入适量的水，充分混合(注意避免培养基结块)，然后加水至所需的量后适当加热，并重复或连续搅拌使其快速分散，必要时应*溶解。含琼脂的培养基在加热前应浸泡几分钟。

三、pH的测定和调整

    用pH计测pH，必要时在灭菌前进行调整，除特殊说明外，培养基灭菌后冷却至25℃时，pH应在标准pH±0.2范围内。一般使用浓度约为40g/L(约1mol/L)的氢氧化钠溶液或浓度约为36.5g/L(约1mol/L)的盐酸溶液调整培养基的pH。如需灭菌后进行调整，则使用灭菌或除菌的溶液。

四、分装

    将配好的培养基分装到适当的容器中，容器的体积应比培养基体积zui少大20%。

五、灭菌

    1.一般要求

    培养基应采用湿热灭菌法或过滤除菌法。

    某些培养基不能或不需要高压灭菌，可采用煮沸灭菌，如SC肉汤等特定的培养基中含有对光和热敏感的物质，煮沸后应迅速冷却，避光保存；有些试剂则不需灭菌，可直接使用。

    2.湿热灭菌

    湿热灭菌在高压锅或培养基制备器中进行，高压灭菌一般采用121℃±3℃灭菌15min，具体培养基按食品微生物学检验标准中的规定进行灭菌。培养基体积不应超过1000 mL，否则灭菌时可能会造成过度加热。所有的操作应按照标准或使用说明的规定进行。

    灭菌效果的控制是关键问题。加热后采用适当的方式冷却，以防加热过度。这对于大容量和敏感培养基十分重要，例如含有煌绿的培养基。

    3.过滤除菌

    过滤除菌可在真空或加压的条件下进行。使用孔径为0.2μm的无菌设备和滤膜。消毒过滤设备的。

    各个部分或使用预先消毒的设备。一些滤膜上附着有蛋白质或其他物质，为了达到有效过滤，应事先将滤膜用无菌水润湿。

    4.检查

    应对经湿热灭菌或过滤除菌的培养基进行检查，尤其要对pH、色泽、灭菌效果和均匀度等指标进行检查。

六、添加成分的制备

    制备含有有毒物质的添加成分(尤其是抗生素)时应小心操作(必要时在通风柜中操作)，避免因粉尘的扩散造成实验人员过敏或发生其他不良反应；制备溶液时应按产品使用说明操作。

    不要使用过期的添加剂；抗生素工作溶液应现用现配；批量配制的抗生素溶液可分装后冷冻贮存，但解冻后的贮存溶液不能再次冷冻；厂商应提供冷冻对抗生素活性影响的有关资料，也可由使用者自行测定。

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