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大鼠纤维介素蛋白(fgl2)酶联免疫分析试剂盒使用说明书
阅读:1315 发布时间:2016-1-27本试剂盒仅供研究使用。
检测范围: 96T 6.0ng/L - 180ng/L
使用目的:
本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中纤维介素蛋白(fgl2)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠纤维介素蛋白(fgl2)水平。用纯化的大鼠纤维介素蛋白(fgl2)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入纤维介素蛋白(fgl2),再与HRP 标记的纤维介素蛋白(fgl2)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的纤维介素蛋白(fgl2)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中大鼠纤维介素蛋白(fgl2)浓度。
操作步骤
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
180ng/L 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液
90ng/L 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液
45ng/L 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液
22.5ng/L 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液
11.25ng/L 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液:将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此重复5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10 分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止液后15 分钟以内进行。
操作程序总结:
计算
以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
保存条件及有效期
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 个月