使用夹心法ELISA检测白介素6的实验方法下载

试剂器材

1、试剂盒提供包被抗体、酶标抗体、标准品，底物(ABTS)、96孔elisa板。

2、包被缓冲液、PBS、底物缓冲液配制同常规ELISA法。

操作步骤：

1. 包被：pH9.5 碳酸盐缓液稀释4D7单克隆抗体粗提γ球蛋白至1μg/ml,加入96孔板,100μl/孔，放4℃,36小时。

2. 封闭：0.1%吐温PBS(Buffer A)冲洗96孔板三次，加3%BSA Buffer A(Buffer B)200μl/孔，放37℃,1小时。

3. 加待检样品：Buffer A 冲洗96孔板三次，加待检样品及Buffer B 稀释的标准品100μl/孔，放37℃,3小时。

4. 加酶标抗体：Buffer A冲洗96孔板五次,3%PEG Buffer A稀释酶标抗体至1∶800，加入96孔板，100μl/孔，放37℃,1小时。

5. 显色：Buffer A冲洗96孔板五次，pH5.4柠檬酸缓冲液溶解底物(ABTS),0.2mg/ml,加3%H2O2,2μl/ml，加入96孔板，100μ/孔，室温下或37℃显色。

注意！

1. 待检标本如为血清，应采用一次性容器，血液采集后尽快(6小时以内)分离血清。

2. 封闭液或抗体稀释液应新鲜配制或冻存。