电针对非酒精性脂肪肝大鼠血清及肝组织白介素－１８的影响

王 力 龚 标 朱丽丽 卓廉士 李学智 张沁舒 伍 芳

（重庆医科大学中医药学院，重庆 ４０００１６）

【摘 要】 目的：探讨电针对非酒精性脂肪肝（ＮＡＦＬＤ）大鼠白介素－１８（ＩＬ－１８）的影响及治疗 ＮＡＦＬＤ 的机制。方法：将４４只ＳＤ大鼠随机分为造模组３３只，空白组１１只。造模大鼠喂养高糖高脂饲料５周制备ＮＡＦＬＤ模型，造模成功后，随机分为模型组、电针组和非穴组。电针组针刺“足三里”“丰隆”“三阴交”“太冲”穴（连续波，频率２Ｈｚ，强度１．５Ｖ），非穴组针刺大鼠尾巴中１／３段随机４处，每日治疗１次，连续４周。采用全自动化学分析仪检测大鼠空腹血糖（ＦＢＳ），放射免疫法检测空腹胰岛素（ＦＩＮＳ），计算空腹胰岛素抵抗指数（ＦＩＲＩ），采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测血清及肝组织匀浆ＩＬ－１８含量变化，ＨＥ 染色观察肝组织病理学改变。结果：针刺４周后，模型组 ＦＢＳ、ＦＩＮＳ、ＦＩＲＩ、肝组织和血清ＩＬ－１８与空白组比较都显著升高（Ｐ＜０．０１），模型组肝组织出现不同程度的脂肪变性；电针组 ＦＢＳ、FＩＮＳ、ＦＩＲＩ、肝组织匀浆ＩＬ－１８和血清ＩＬ－１８与模型组比较都显著下降（Ｐ＜０．０５），电针组肝组织内脂肪性变减轻；非穴组 ＦＢＳ、ＦＩＮＳ、ＦＩＲＩ、肝组织匀浆ＩＬ－１８和血清ＩＬ－１８与模型组比较变化都不明显（Ｐ＞０．０５），非穴组肝组织内脂肪性变无明显改善。结论：电针可能通过降低肝组织及血清ＩＬ－１８，阻断多糖攻击肝脏所致的损伤作用，改善肝脏功能，而实现对ＮＡＦＬＤ大鼠的治疗作用。

【关键词】 非酒精性脂肪肝 电针干预 白介素－１８ 胰岛素抵抗

在非酒精性脂肪肝（ＮＡＦＬＤ）的发病过程中，脂肪组织分泌的脂肪因子随血液直接进入肝脏，调节胰岛素的敏感性，改善糖、脂代谢等。近年临床报道显示［１－２］，针刺治疗 ＮＡＦＬＤ确有明显疗效，且具有安全性高、副作用小等优势。实验研究表明，电针治疗 ＮＡＦＬＤ 主 要 是 通 过 改 善 胰 岛 素 抵 抗 （ＩＲ）状态［３］，降低血脂，减轻脂质过氧化反应，来改 善 肝 组织的脂肪变性和 炎 性 损 伤［４－６］。白 介 素（ＩＬ）－１８是一种与ＩＲ 密 切 相 关 的 重 要 细 胞 因 子［７］，研 究 其 与ＩＲ的相关性，深 入 阐 明 ＮＡＦＬＤ 发 病 机 制，可 更 进一步了解 针 刺 治 疗 ＮＡＦＬＤ 的 作 用 机 制。有 鉴 于此，本研究建立 ＮＡＦＬＤ 大鼠模型，观察针刺对ＩＬ－１８的影响，探讨针刺治疗 ＮＡＦＬＤ的作用机制。

１ 材料与方法

１．１ 动物与分组雄性ＳＤ大鼠４４只，体 质 量（１７０±２０）ｇ，清 洁级，购自重庆医科大学动物中心［实验动物生产许可证号ＳＣＸＫ（渝）２００７－０００１］，此研究获得重庆医 科大学医学研究伦理委员会的批准。分笼饲养３ｄ，随机分为空白组１１只和造模组３３只，５周末，随机抽取空白组大鼠１只和造模组大鼠３只，采用水合氯醛过量麻醉处死，测量相关指标，然后将３０只造模大鼠随机分为模型组、电针组和非穴组各１０只。

１．２ 主要试剂及仪器

猪油和蛋黄粉为市售；胆固醇购于重庆医科大学设备科；丙基硫氧嘧啶（湖南迪诺制药有限公司，批号１００３０６）购 自 药 店；胰岛素放射免疫试剂盒购自北方生物 技 术 研 究 所；ＩＬ－１８酶联免疫分析试 剂盒购自上海恒远生物科技有限公司。１００℃水浴箱（常州国华电器 有 限 公 司）、８０－２型 低 速 离 心 机（上海手术器械厂）、赛多利斯 ＢＳ１１０Ｓ电子秤（德国赛多利斯公司）、ＵＮＩＣＯ７２００分光光度计［龙尼柯（上海）仪器有限公司］、生物显微镜（日立公司）、图像采集系统（北京３０１医院）等设备由重庆医科大学基础医学院提供，电针综合治 疗 仪（华 佗 牌 ＳＤＺ－Ⅱ型）、毫针（０．２８ｍｍ×２５ｍｍ，华 佗 牌）由重庆医科大学中医药学院针灸实验室提供。

１．３ 造模方法

造模组大鼠采用杨坤造模法［８］，即 喂 养２％胆固醇、０．２％丙基硫氧嘧啶、１０％猪油、１０％蔗糖、５％蛋黄粉、７２．８％普通饲料混合而成的高糖高脂饲料５周。５周末，随机麻醉过量处死空白组大鼠１只和造模组大鼠３只，病理切片表明，造模组大鼠较同期空白组大鼠肝细胞体积明显增大，肝组织出现不同程度的脂肪变性，且以大泡性为主，证明 ＮＡＦＬＤ已经形成。

１．４ 针刺方法

根据疏肝健脾、祛痰化湿、活血化瘀治 则，电 针组取大鼠“足三里”“丰隆”“三阴交”“太冲”穴，非穴组在尾部中１／３段取任意４点作为对照，大鼠腧穴按《实验针灸学》定位［９］。针刺方法：将大鼠置于大鼠固定器（重庆医科大学中医药学院实验中心提供）中，取一侧上述诸穴，分别刺入０．５１ｃｍ 深，然 后 接通电针综 合 治 疗 仪，将“足 三 里”与“三 阴 交”相 接，“丰隆”和“太冲”相接，非穴组４部位两两相接，选择连续波，电针频率２Ｈｚ，强度１．５Ｖ，以下肢轻微抖动为 宜，保 持 大 鼠 处 于 清 醒 状 态。每 日１次，每 次１５ｍｉｎ左右，连续治疗４周，左右侧穴隔日轮换。治疗期间，空白组大鼠亦分别置入固定器中１５ｍｉｎ，无其它处理。

１．５ 观察指标及检测方法

空腹血糖（ＦＢＳ）、空 腹 胰 岛 素（ＦＩＮＳ）、空 腹 胰岛素抵抗指数（ＦＩＲＩ）、肝组织匀浆ＩＬ－１８和血清ＩＬ－１８的测定：实验９周末，大鼠禁食２４ｈ后称重，采用１０％水 合 氯 醛 （３ｍＬ／ｋｇ）麻 醉，经 心 脏 穿 刺 采 血５ｍＬ，低 温 离 心 机 上 ３０００ｒ／ｍｉｎ 离 心 后，置 于－８０℃冰箱保存待测。取冰冻保存的血清标本，置室温中复融，混匀后用全自动化学分析仪检测ＦＢＳ，放射免疫法测定 ＦＩＮＳ，双抗体夹心法检测血清ＩＬ－１８。ＦＩＲＩ＝ｌｎ（ＦＢＳ×ＦＩＮＳ／２２．５）。心脏采血后，迅速解剖摘取 肝 脏，取 肝 左 叶 相 同 部 位 ３ 块 肝 组 织，１０％甲 醛 固 定，常 规 石 蜡 包 埋、切 片 （切 片 厚 度 约４μｍ），ＨＥ染色，光 镜 下 观 察。余下肝脏用生理盐水漂洗去除 血 液，滤 纸 拭 干，称 取３ｇ，加 入 冰 盐 水３０ｍＬ，在冰水中匀浆，制 成１０％组 织 匀 浆，低 温 离心机上３０００ｒ／ｍｉｎ离 心 后 取 上 清 液，置 于－８０℃冰箱保存待测。取冰冻保存的匀浆上清液标本，置室温中复融，双抗体夹心法检测肝组织匀浆ＩＬ－１８。

１．６ 统计学处理

统计学处理采用 ＳＰＳＳ１８．０软件，计量数据资料采用均数±标准差（ｘ珚±ｓ）表示，组间比较使用单因素方差分析中的ＳＮＫ 法。Ｐ＜０．０５为 差 异 有 统针刺研究 ２０１３年６月 第３８卷 第３期 · ９０２ ·计学意义。

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