双抗体夹心法原理：固相载体上包被抗体，再加入待测抗原（可以是血清或者其它样本），洗板（洗掉非特异性吸附），再加入酶标抗体，再洗板（洗掉非特异性吸附），再加底物显色。这里有几点需要注意：①抗原是大分子抗原，具有2个以上的抗原表位；②包被抗体和酶标记的抗体都是针对抗原的特异性抗体，只不过它们分别针对的是不同抗原表位，经常被称作一抗和二抗；③酶是催化底物显色的，起到一个信号放大作用。
操作步骤如下：
1） 将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。
2） 加受检标本，保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。
洗涤除去其他未结合物质。
3） 加酶标抗体，保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。*洗涤未结合
的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。
4） 加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色，测知标本中抗原的量。