根据实验室技术案例，以下为大家分享免疫荧光技术的操作方法流程。

免疫荧光技术（immunofluorescence，IF）是根据抗原-抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成荧光标记物，再用这种荧光抗体（或抗原）作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。用免疫荧光技术显示和检查细胞或组织内抗原物质或半抗原物质等方法称为免疫荧光细胞（或组织）化学技术。

免疫荧光技术的操作流程：

（1）选取一抗时要来源于两种不同的动物，我用的是来源于rabbit和rat的抗体，二抗则是不同荧光信号标记的，我用的是donkey anti-rabbit-FITC（绿）和donkey anti-rat-Tex-Red（红）。

（2）我的做法是两种一抗同时孵育，然后两种二抗同时孵育。抗体浓度、孵育时间要仔细摸索，我感觉一抗4度孵育过夜比较好，背景比较清晰。

（3）我的阳性对照用的是阳性组织切片，阴性对照则分别是家兔和大鼠的IgG，荧光标记物对照是PBS+荧光标记物。

（4）封闭血清与二抗来源动物一致，我用的是10%的正常donkey血清。

（5）其余步骤同一般免疫荧光单标操作。

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