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游离血红蛋白测定原理及方法(血浆)
阅读:4524 发布时间:2013-5-23游离血红蛋白测定原理及方法(血浆)
实验原理
血红蛋白具有类过氧化物酶活性,可催化H2O2释放新生态氧,使邻甲联苯胺氧化发生颜色变化,由无色zui终变为蓝紫色。根据显色深浅与标准进行比较,可测出其含量。
实验方法
材料:
1.2g/L邻甲联苯胺溶液
2.1%H2O2
3.10%醋酸溶液
4.分光光度计
方法:
1.抽取静脉血2-3ml,枸橼酸钠抗凝,离心分离血浆。
2.按下表进行操作,用分光光度计,波长为530nm,以空白管调零,测定测定管的吸光度。
试剂 (ml) | 测定管 | 空白管 |
2 g/L邻甲联苯胺溶液 | 0.5 | 0.5 |
患者血浆 | 0.02 | / |
1% H2O2 | 0.5 | 0.5 |
混匀后室温放置10min | ||
10%醋酸溶液 | 5.0 | 5.0 |
室温放置10min |
注意事项
1.一切容器避免血红蛋白污染;
2.采血要顺利,器皿要干燥,检测血浆要新鲜,及时分离,防止人为溶血;
3.邻联苯胺溶液具致癌性,检测时要小心,废液要妥善处理,以免污染;
4.双氧水要新鲜配置,浓度要准确。
「临床意义」 血浆游离血红蛋白的增加是血管内溶血的指征。假如血浆中游离血红蛋白达到一定水平时(900~1000mg/L)就可由尿液排出,即伴有血红蛋白尿症,见于蚕豆黄、PNH、阵发性严寒性血红蛋白尿,不稳定血红蛋白症,冷凝集综合征等。
自身免疫性溶血性贫血,镰形细胞贫血及海洋性贫血血浆游离血红蛋白可轻度可中度增加。
严重输血反应,尤其是血型不合,可发生严重的输血反应,使血浆游离血红蛋白大幅度增加,可能对肾小管有毒性作用,引起严重肾脏损害,危及生命。
体外循环,如人工心肺,人工肾手术应用以后,医学教|育网|收集整理红细胞可被机械性大量破坏,也可使血浆游离血红蛋白增高。
贮存库血2~3周后,游离血红蛋白可达500mg/L。
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