ELISA试剂盒试验3个阴性对照A值均应≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此计划，则弃去，算了另两个阴性对照从头核算NCX；如有两个阴性对照A值超出以上计划，则该次试验无效。在条件许可下，应该用比色计测定吸光值，这么能够得到客观的数据。  现举某种检查 HBsAg的试剂盒为例,先读出标本（sample，S）、阳性对照（P）、和阴性对照（N）的吸光值，然后进行核算。核算方法有多种，大致可分为阳性断定值法和标本与阴性对照比值法两类。阳性对照品HBsAg的含量标明为P=9±2ng /ml。每次试验设2个阳性对照和3个阴性对照。

   ELISA试剂盒阳性断定值公式中的常数是在这特定的系统中通过对许多标本的试验检查而得到的。ELISA试剂盒阳性断定值（cut-off value）一般为阴性对照A值加上一个特定的常数，以此作为区别作用阳性或阴性的规范。
用此法区别作用央求试验条件非常稳定，试剂的制备有必要规范化，阳性和阴性的对照品应符合一定的规范，须配用精密的仪器，并严重按规则操作。
   ELISA试剂盒中的阴性对照品为不含HBsAg的复钙人血浆，目视法简捷明晰，但颇具主观性。
测得A值后，先核算阴性对照A值的平均数（NC X ）和阳性对照A值的平均数（PCX），两个平均数的差（P-N）有必要大于一个特定的数值（例0.400），试验才有用。
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