相信对于一些新手ELISA实验人员来说，实验做得不理想是难免的事。这不，就在昨天下午，我公司就收到一客户的咨询。这位客户说道：“初次用间接法做ELISA实验，做了几次结果都没有显色，原因在哪里呢”
   
针对问题描述，上海恒远技术员分析出为何间接ELISA没有显色，可能原因有这几个方面：
   1.包被原：包括你的包被液有无问题，有没有配错。包被原一般加100微升，37度2小时；
   2.封闭：封闭液用的是否适合？你说做了几次都没显色，空白孔也不显吗？如果空白也无颜  色，那封闭就没有问题。一般封闭是200微升每孔，也可以满孔封闭
   3.一抗：检查你的一抗是否失效。是否是在37度反应
   4.二抗：底物，底物缓冲液……这些都要好好检查！
   5.洗涤：用PBST洗涤，包被和封闭时洗板3次；一抗二抗洗涤5次，每次间隔3分钟。手工和机器洗涤没什么不同，就是省力一些。洗5次不会有负影响，在一抗和二抗洗涤过程中，恰恰需要多洗几次，这样有助于减少非特异性吸附。
 
                          
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