总所周知，的试剂，良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件.在ELISA实验操作前应该将试剂在室温下平衡半小时到一个小时左右的时间。这是实验过程的必要准备。今天的文章中为大家分享ELISA试剂盒的实验步骤，让我们一起对ELISA实验say:easy!

1、加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在上海恒远生物白介素ELISA试剂盒酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
2、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
3、配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
4、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
5、温育：操作同3。
6、洗涤：操作同5。
7、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
8、终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
9、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
10、计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
                                                   
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