本公司酵母化学感受态细胞制备试剂盒说明书

酵母化学感受态细胞制备试剂盒
Yeast Chemical Competent Cell Preparation Kit

产品及特点： 本酵母化学感受态细胞制备试剂是一种通过化学处理，快速制备酵母化学感受态细胞，用于长期冻存以备后续转化的产品，它具有下列特点：
一次制备， -80℃保存，多次使用。
操作简单，单溶液制备，除酵母培养的时间外，整个操作只需要30分钟
试剂盒含转化液，即开即用。
得到的感受态细胞的zui高转化效率在0.2-1×105个转化子/ug质粒DNA。
适用于各种实验用酵母菌株，包括S. cerevisiae、C. albicans、S. pombe、Pichia pastoris等。也可用于携带有选择性质粒的酵母。
得到的感受态细胞可即刻转化各种线性或环状酵母穿梭质粒，例如YIp, YRp, YCp, YEp和YAC等。
可以用于定点突变（Site－Directed Mutagenesis）、基因破坏（Gene Disruption）、等位突变基因修复（Mutant Allele Recovery）、酵母双杂交系统等实验。
规格及成分


使用方法
 

一：酵母感受态细胞的制备
1、制备一管酵母感受态细胞需要OD600达到0.6-1.0的新鲜酵母培养液10mL，如果超过10mL，各成分体积按比例增加。
2、挑取酵母受体菌的新鲜的单菌落（4℃放置不超过3周的也可以），接种到装在50mL 离心管中的10 mL的YPAD培养基中。
3、30℃摇晃培养，摇床速度250rpm/分钟，直到OD600达到0.6-1.0（相当于0.6-1×107细胞/mL）。4、室温1000-5000rpm离心5min，弃上清。
5、用0.5倍体积的溶液A（即5mL）洗涤细胞沉淀一次。
6、用0.02倍体积的溶液A（即0.2mL）充分重悬菌体。
7、按每管0.1 mL分装到冷冻管中，放入保温冰盒中后再放入-80℃待用。放入保温冰盒的目的是使温8、度缓慢下降。注意：不能直接放入液氮中快速冷冻，否则转化效率会降低，这点跟大肠杆菌不同。
 

二：转化酵母感受态细胞
 

1、将0.1-5 ug质粒DNA和50ug 单链DNA混合，总体积不得超过20uL。
2、将混合液转移到新取出的酵母感受态细胞上。
3、37℃水浴，每10-15秒混合一次，直到细胞溶液*融化。
4、加入1.4mL转化液溶液A，振荡一分钟。
5、30℃培养一小时。
6、室温3000g离心5秒，弃上清。
7、在沉淀中加1mL 转化液溶液B。
8、在选择培养基上涂盘。