人NADH酶联免疫分析试剂盒使用说明书

　　使用目的：
　　
　　本试剂盒用于测定人培养细胞及相关液体样本中NADH含量。
　　
　　实验原理
　　
　　本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人NADH水平。用纯化的人NADH抗体包被微
　　
　　孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入NADH，再与HRP标记的NADH抗体
　　
　　结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP
　　
　　酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的NADH
　　
　　呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人
　　
　　NADH浓度。
　　
　　标本要求
　　
　　1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
　　
　　马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
　　
　　2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
　　
　　操作步骤
　　
　　1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释
　　
　　2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
　　
　　待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl，待测样品孔中先加样品稀释液40µl，
　　
　　然后再加待测样品10µl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
　　
　　量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
　　
　　3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
　　
　　4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
　　
　　5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
　　
　　重复5次，拍干。
　　
　　6.加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。
　　
　　7.温育：操作同3。
　　
　　8.洗涤：操作同5。
　　
　　9.显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
　　
　　10分钟.
　　
　　10.终止：每孔加终止液50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
　　
　　11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止
　　
　　液后15分钟以内进行。
　　
　　计算
　　
　　以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的
　　
　　OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标
　　
　　准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，
　　
　　即为样品的实际浓度。
　　
　　注意事项
　　
　　1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
　　
　　用完，板条应装入密封袋中保存。
　　
　　2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
　　
　　3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间
　　
　　控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
　　
　　4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值
　　
　　大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计
　　
　　算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。
　　
　　5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
　　
　　6．底物请避光保存。
　　
　　7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
　　
　　8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
　　
　　9．本试剂不同批号组分不得混用。
　　
　　保存条件及有效期
　　
　　1．试剂盒保存：；2-8℃。
　　
　　2．有效期：6个月