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人上皮型钙粘蛋白(E-cad)Elisa试剂盒

时间:2011-4-28阅读:272
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本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断。
【人上皮型钙粘蛋白(E-cad)Elisa试剂盒试剂盒用途】
定量检测人血清、血浆及相关液体样本中上皮型钙粘蛋白(E-cad)的含量。
【人上皮型钙粘蛋白(E-cad)Elisa试剂盒检测原理】
本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)。将标准品、待测样本加入到预先包被人上皮型钙粘蛋白(E-cad)单克隆抗体透明酶标包被板中,温育足够时间后,洗涤除去未结合的成分,再加入酶标工作液,温育足够时间后,洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根过氧化物酶(HRP)催化下转化为蓝色产物,在酸的作用下变成黄色,颜色的深浅与样品中人上皮型钙粘蛋白(E-cad)浓度呈正相关,450nm波长下测定OD值,根据标准品和样品的OD值,计算样本中人上皮型钙粘蛋白(E-cad)含量。
【人上皮型钙粘蛋白(E-cad)Elisa试剂盒试剂盒组成】
1
酶标包被板
12孔×8条
7
显色剂A液
6mL

2
标准品
0.3mL×6管
8
显色剂B液
6mL

3
20倍浓缩洗涤液
25mL
9
终止液
6mL

4
样本稀释液
6mL
10
说明书
1份

5
特殊稀释液
6mL
11
封板膜
2张

6
酶标试剂
6mL
12
密封袋
1个
 

备注:标准品(1号→6号)浓度依次为:320、160、80、40、20、10 ng/L.
【需要而未提供的试剂和器材】
1、37℃恒温箱
2、标准规格酶标仪
3、精密移液器及一次性吸头
4、蒸馏水
5、一次性试管
6、吸水纸
【操作步骤】
1、准备:从冰箱取出试剂盒,室温复温平衡30分钟。
2、配液:用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。
3、加标准品和待测样本:取足够数量的酶标包被板,固定于框架上,分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔,记录各孔位置,在标准品孔中加入标准品50μL;待测样本孔中先加入待测样本10μL,再加样本稀释液40μL(即样本稀释5倍);空白对照孔不加。
4、温育:37℃水浴锅或恒温箱温育30min。
5、洗板:弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。
6、加酶标工作液:每孔加入酶标工作液50μL,空白对照孔不加。
7、温育:37℃水浴锅或恒温箱温育30min。
8、洗板:弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。
9、显色:每孔先加入显色剂A 液50μL,再加入显色剂B液 50μL,平板混匀器混匀30s(或用手轻轻震荡混匀30s),37℃避光显色15min。
10、终止:取出酶标板,每孔加终止液50μL,终止反应(颜色由蓝色立转黄色)。
11、测定:以空白孔调零,在终止后15分钟内,用450nm波长测量各孔的吸光值(OD值)。
12、计算:根据标准品的浓度及对应的OD值,计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样本的OD值,在回归方程上计算出对应的样品浓度,也可以使用各种应用软件来计算。zui终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。
 

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