生物素标记试剂的合成方法改进及其在DNA合成中的应用

生物素标记试剂的合成方法改进及其在DNA合成中的应用
近年来，核酸探针杂交技术在医疗科研和临床中被广泛采用，成为一项直接检查病原体、癌基因、
遗传病基因突变等的重要手段。用于杂交的核酸探针必须先进行标记，可分为同位素标记和非同位
素标记两大类。生物素标记的核酸探针属于非同位素标记，它是利用亲和素对生物素有*亲和力
的原理，分子杂交后用亲和素或链霉亲和素进行检测［1～4］。生物素标记探针稳定，不失活，并
能配用多种检测系统，简单方便。
Richard T Pon［5］设计合成了一种较为理想的生物素标记试剂———［1-N-（4，4’-二甲氧
基三苯甲基）-生物素-6-氨基己基］-2-氰乙氧基-N，N-二异丙基亚磷酰胺（3）。3所含的6-氨基己基
侧链显著增加了生物敏感性［6］，同时3中的二甲氧三苯基增加了稳定性，不仅有利于寡核苷酸链
的合成与纯化，而且还可以在DNA合成仪上通过颜色变化检测连接效率。
为了推进3的应用，本文改进文献［5］方法，先将生物素与DMTrCl（4，4’-二甲氧基三苯基氯
甲烷）反应制得1-N-（4，4’-二甲氧基三苯甲基）生物素（1）;1与6-氨基-1-己醇在中缩合
制得1-N-（4，4’-二甲氧基三苯甲基）生物素-6-氨基己醇（2）;2与磷试剂2-氰乙氧基-双（N，N-二异
丙基）亚磷酰胺（Ⅰ）［7］反应合成了3（Scheme1），总收率51．0%，其结构经1H NMR，13 C NMR，
31P NMR和MS确证。
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