细菌实验蛋白质提取纯化技术介绍

细菌实验蛋白质提取纯化技术介绍

实验试剂
采用T7• Tag Affinity Purification Kit
T7•Tag抗体琼脂。B/W缓冲液：4.29mM Na2HPO4，1.47 mM KH2PO4，2.7 mM KCl， 0.137mM NaCl，1%吐温-20，pH7.3 洗脱缓冲液: 0.1M柠檬酸，pH2.2. 中和缓冲液：2M Tris，pH10.4。 PEG 20000。

实验步骤
1.100ml 含重组表达质粒的菌体诱导后，离心5000g×5min，弃上清，收获菌体，用10ml预冷的B/W缓冲液重悬。
2. 重悬液于冰上超声处理，直至样品不再粘稠，4℃离心 14000g×30min，取上清液，0.45μm膜抽滤后作为样品液。
3. 将结合T7•Tag抗体的琼脂充分悬起，平衡至室温，装入层析柱中。
4. B/W缓冲液平衡后样品液过柱。
5. 10ml B/W缓冲液过柱，洗去未结合蛋白。
6. 用5ml洗脱缓冲液过柱，每次1ml，洗脱液用含150μl中和缓冲液的离心管收集，混匀后置于冰上，直接SDS-PAGE分析。
7. 将洗脱下来的蛋白放入透析袋中，双蒸水透析24hr，中间换液数次。
8. 用PEG 20000浓缩蛋白。

注意事项
蛋白在过层析柱前，要0.45μm膜抽滤，否则几次纯化后，柱子中会有不溶物。

鱼肝细胞生长因子(HGF)ELISA Kit    ，英文名：    Fish hepatocyte growth factor,HGF ELISA Kit    ，规格：    48T/96T
鱼钙调磷酸酶(CaN)ELISA Kit    ，英文名：    Fish Calcineurin,CaN ELISA Kit    ，规格：    48T/96T
鱼酚氧化酶(PO)ELISA Kit    ，英文名：    Fish phenol oxidase,PO ELISA Kit    ，规格：    48T/96T
鱼多巴铵(DA)ELISA Kit    ，英文名：    Fish dopamine,DA ELISA kit    ，规格：    48T/96T
鱼胆囊收缩素/肠促胰酶肽(CCK)ELISA Kit    ，英文名：    Fish Cholecystokinin,CCK ELISA Kit    ，规格：    48T/96T
鱼催乳素(PRL/LTH)ELISA Kit    ，英文名：    Fish Prolactin/Luteotropic Hormone,PRL/LTH ELISA Kit    ，规格：    48T/96T
鱼促肾上腺皮质激素(ACTH)ELISA Kit    ，英文名：    Fish adrenocorticotropic hormone,ACTH ELISA kit    ，规格：    48T/96T
鱼促甲状腺素(TSH)ELISA Kit    ，英文名：    Fish thyroid stimulating hormone,TSH ELISA Kit    ，规格：    48T/96T