研生试剂-细胞因子受体检测的基本技术

                           研生试剂-细胞因子受体检测的基本技术

1．活细胞吸收试验  将过量的待测细胞与*细胞因子(配基)共孵育，若细胞膜表面存在相应的受体即可吸收配基，通过测定回收后配基生物活性的丧失情况可确定受体是否存在。此法简便，适用于定性，但不适用于定量检测。

    2．核素标记重组配基的放射受体分析

    这是确定细胞受体分布及其特性的主要方法，可测定受体的数量及亲和力。一般采用：①重组细胞因子体外标记核素；②利用cDNA转录获得足够量的细胞因子mRNA，注入非洲爪蟾卵母细胞内，在体外翻译的底物中加入核素标记的氨基酸(如³⁵S-Met或3H-Leu等)。通过生物合成内标记产生的重组细胞因子的功能不受影响，因此适用于某些稳定性较差的细胞因子的检测。

    3．抗受体McAb法  利用McAb既可通过封闭受体抑制相应细胞因子的生物学活性进行受体检测，也可用标记的McAb直接作免疫放射受体分析或免疫沉淀。

    4．重组细胞因子与受体的交联分析

    利用化学交联剂将标记的重组细胞因子与膜受体交联，细胞裂解物经PAGE后进行放射自显影分析，通过带型分析可确定受体的分子量及亚单位。

    5．受体cDNA分析  分子克隆是在基因水平上研究细胞因子受体的*途径，通过核苷酸序列推导的氨基酸顺序进行结构功能区分析，是深入探讨受体作用机制的基础。受体cDNA片段可用来制作cDNA探针以研究受体基因的转录功能及表达调控。此外还可利用基因工程技术重组受体分子。目前已有10多种细胞因子受体的基因被克隆出来，包括IL-1R，IL-2Ra，IL-2即，IL-3R，IL-4R，IL-6R，IL-7R，INF/R，MPOR，M-CSFR等。

    6．可溶性细胞因子受体的检测  某些细胞因子受体除存在于细胞膜外，尚可分泌进入体液，称为可溶性细胞因子受体(solublecytokinereceptor)，如slL-2R，slL-4R和slFN-yR。这类受体多采用免疫学方法检测。下面以IL-2R为例介绍细胞因子受体的检测方法，这些方法也适用于其他细胞因子受体的检测。