研生试剂-支原体检测试剂盒说明书

                         研生试剂-支原体检测试剂盒说明书

产品简介：
　　
　　支原体（mycoplasma）：又称霉形体，为目前发现的zui小的zui简单的原核生物，估计有15%~35%的细胞被支原体污染。支原体污染会对细胞造成多方面的影响，包括代谢、免疫或生化特性、生长状况、以及细胞存活等多方面的改变，影响实验结果的稳定性、可靠性和准确性；支原体难以检测，同时也很难消除，其能轻易地通过0.22μm标准滤膜，同时也能拮抗绝大多数的抗生素，给细胞培养造成巨大损失。因此细胞都需要定期（如每2~3个月）进行支原体污染的检测。许多方法可用于检测支原体，包括肉汤或琼脂培养，直接或间接的荧光染色、ELISA、直接或间接的PCR法等，其中，直接PCR法灵敏度高。本试剂盒能检测支原体种类包括M.Hyorhinis,M.Arginini,M.Orale,M.Fermentans,A.laidlawii等常见支原体，这5种支原体代表了98%以上的细胞支原体污染。同时还能检测Mycoplasma,Acholeplasma,Ureaplasma,Spiroplasma等种属。
　　
　　产品实验【操作流程】
　　
　　1、样品准备：在实验前几天，细胞需用无抗生素的培养基进行培养，待细胞生长至80%以上开始试验。
　　
　　A、样品为细胞
　　
　　1、弃去培养瓶内的细胞培养基。
　　
　　2、用DPBS洗2次细胞。
　　
　　3、加入适量的裂解液（以24孔板为例，每孔100ul）裂解细胞，室温放置5分钟。
　　
　　4、收集细胞裂解液，放入离心管中。
　　
　　5、细胞裂解液95°C处理5分钟。
　　
　　6、13000rpm离心5分钟，上清转入一只新离心管。
　　
　　7、取1~2ul上清作为模板进行PCR反应。
　　
　　B、样品为培养上清
　　
　　1、取1~1.5ml细胞培养上清，放入离心管中。
　　
　　2、13000rpm离心5分钟。
　　
　　3、弃上清，用DPBS洗沉淀一次。
　　
　　4、加入100ul裂解液裂解细胞，上下颠倒混匀后，室温放置5分钟。
　　
　　5、细胞裂解液95°C处理5分钟。
　　
　　6、13000rpm离心5分钟，上清转入一只新离心管。
　　
　　8、取1~2ul上清作为模板进行PCR反应。
　　
　　2、PCR反应
　　
　　本试剂盒提供的8连管已预加入反应引物（其中8号管同时已预加入阳性模板，为阳性对照），使用前请先离心后小心开启，以免飞扬丢失。Taq、pfu、KOD等酶及常规PCRMix都适用于本试剂盒的PCR反应，具体反应条件可以参考相关酶或者PCRMIX产品说明书。以Taq酶为例，推荐如下：

　　
　　3、结果判定
　　
　　在阴阳性对照成立的条件下，对样品结果进行判定