小鼠肌红蛋白(MYO/MB)试剂盒ELISA

小鼠肌红蛋白(MYO/MB)试剂盒ELISA操作流程：

（1)，待测样品孔中每孔加入待测样品100μ1，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理

组的细胞裂解液100μ1；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μ1。

(2）酶标板置4℃，包被过夜。

（3）洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去），之后将洗涤液注满板

孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。

（4）阴性对照孔每孔加入PBS50μ1，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的免抗人AIF抗体工作液50μ1。

（5）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。

(6）洗板，同（4）。

(7）每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗免抗体工作液100μ1。

（8）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。

(9）洗板，同（4）。

（10）每孔加TMB显色液100μ1，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。

(11）每孔加100μ12mo1/LH2S04终止反应。

（12）分别测450nm吸光值V1和630nm吸光值V2，最终测得的0D值为两者之差（V1-v2），以减少由容器上

的划痕或指印等造成的光干扰。

（13）数据处理：在得出标本（S）和阴性对照(N)的OD值后，计算S/N值。S/N>2.1为阳性判定标准。