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植物赤霉素(GA)ELISA试剂盒​操作步骤

时间:2022/8/11阅读:442
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植物赤霉素(GA)ELISA试剂盒操作步骤:


实验开始前,各试剂均应平衡至室温;试剂或样品配制时,均需充分混匀,并尽量避免起泡。


1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔,空白孔加标准品&样品稀释液 100μL,余孔分别加标准品或待测样品 100μL,注意不要有气泡,加样时将样品加于酶标板底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,给酶标板覆膜,37℃孵育 90 分钟,为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。


2. 弃去液体,甩干,不用洗涤,每个孔中加入生-物素化抗体工作液 100μL(在使用前15 分钟内配制),酶标板加上覆膜,37℃温育 1 小时。


3. 弃去孔内液体,甩干,洗板 3 次,每次浸泡 1-2 分钟,大约 350μL/每孔,甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。


4. 每孔加酶结合物工作液(临用前 15 分钟内配制)100μL,加上覆膜,37℃温育30 分钟。


5. 弃去孔内液体,甩干,洗板5 次,方法同步骤3。


6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL,酶标板加上覆膜37℃避光孵育15 分钟左右(根据实际显色酌情缩短或延长,但不可超过30 分钟,当标准孔出现明显梯度时,即可终止)。


7. 每孔加终止液 50μL,终止反应,此时蓝色立转黄色,终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。


8. 立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度(OD 值),应提前打开酶标仪电源,预热仪器,设置好检测程序。


9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。

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