小鼠αL岩藻糖苷酶（AFU）elisa检测试剂盒​操作步骤

小鼠αL岩藻糖苷酶(AFU)elisa检测试剂盒操作步骤:

1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在di一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟。

人胚肺成纤维细胞；IMR-90

人胚胎，皮肤，肌肉；M-7

人胚胎，皮肤，肌肉；M-20

人胚胎，皮肤，肌肉；M-22

人正常前列腺上皮细胞；RWPE-1

人羊膜细胞；WISH

人胚肺成纤维细胞；MRC-5

人胚胎肺成纤维细胞；WI-38

人胚肾细胞；293 [HEK-293]

人淋巴细胞；1301

人胚肺二倍体细胞；KMB-17

人胚肺成纤维细胞；WI-38 [WI38]

人脐静脉内皮细胞（人膀胱癌细胞污染）；ECV-304 [ECV304；ECV 304]

人胚肺成纤维细胞；MRC-5

人羊膜细胞；WISH

人二倍体细胞；HEL

人正常肝细胞；L-02

人胚肺细胞VA13细胞；WI-38 VA13亚系2RA

人胚肺二倍体细胞；HL

人肾皮质近曲小管上皮细胞；HK-2

人脐静脉内皮细胞；HUV-EC-C

人胚肾上皮细胞系；KiMA

人胚肺细胞系；KuMA

人永生化淋巴细胞；CNLMG-B5537LC

人类成纤维细胞系；CNLMG-B5537SKIN

人永生化淋巴细胞；CNLMG-B5538LC

人类成纤维细胞系；CNLMG-B5538SKIN

人肺转化细胞；AE1201

人胚肺成纤维细胞；MRC-5

人胚肺二倍体细胞；HEL-1

人胚肾二倍体细胞；HEK-2

人胚肺二倍体细胞；KMB-17

人胚肺二倍体细胞；HEL-2

人胚胎皮肤成纤维细胞；HES

人皮肤成纤维细胞；HSAS4

人皮肤成纤维样细胞；HSF2

人胚胎心脏成纤维样细胞；HEH2

人支气管上皮样细胞；BEAS-2B

转化细胞

SV40T转化的人胚肾细胞；293T

双位点HC-kit受体细胞株；DMF7

人干细胞因子单克隆抗体细胞株；AMS2(SCF3)

人APP-PS1双基因转染细胞株(HEK293)；APP-PS1

Asp2人胚胎肾细胞转化细胞；FC33

人胚肾细胞（亚系克隆）；FIP293