人关节软骨细胞培养细胞培养方法

人关节软骨细胞培养方法：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

MCF7/Adr人乳腺癌阿霉素耐药株
BEL/Adr人肝癌阿霉素耐药株
SGC7901/Adr人胃癌阿霉素耐药株
BIU-87/Adr人膀胱癌阿霉素耐药株
A549/Adr人肺癌阿霉素耐药株
HL-60/Taxol人白血病紫杉醇耐药株
K562/Taxol人白血病紫杉醇耐药株
A2780/Taxol 人卵巢癌紫杉醇耐药株
HO-8910/Taxol人卵巢癌紫杉醇耐药株
HCT8/Taxol人结肠癌紫杉醇耐药株
A549/Taxol 人肺癌紫杉醇耐药株
hct116/L人结肠癌耐奥沙利铂细胞株
lovo/L人结肠癌耐奥沙利铂细胞株
HCT8/L人结肠癌耐奥沙利铂细胞株
BEL/L人肝癌耐奥沙利铂细胞株
SMMC7721/L人肝癌奥沙利铂耐药株
A549/L人肺癌耐奥沙利铂细胞株
HCT8/FU人结肠癌氟尿嘧啶耐药株
ovo/FU人结肠癌氟尿嘧啶耐药株
SMMC7721/FU人肝癌氟尿嘧啶耐药株
PATU-8988/FU人胰腺癌氟尿嘧啶耐药株
SGC7901/FU人胃癌氟尿嘧啶耐药株
A549/FU人肺癌氟尿嘧啶耐药株
K562/DDP人白血病顺铂耐药株
MCF7/DDP人乳腺癌顺铂耐药株