黄曲霉毒素M1(AFM1)ELISA检测试剂盒
一、概要
黄曲霉毒素是一类真菌(如黄曲霉和寄生曲霉)的有毒的代谢产物,它们具有很强的致癌性,主要存在于谷物、坚果、棉籽以及一些和人类血液,动物饲料相关的产品中。黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的羟基化代谢产物,也是一种强致癌物质。牛乳及其制品是易受到黄曲霉毒素M1污染的食品之一。Aflatoxin M1的检测方法有液相色谱法(HPLC),薄层层析法(TLC)等。而使用黄曲霉毒素M1 ELISA试剂盒则能够快速而准确的分析样品中黄曲霉毒素M1残留。
本试剂盒是应用ELISA技术的新一代真菌毒素检测产品,操作时间短于60min,能zui大限度地减少操作误差和工作强度。
二、试验原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法,在酶标板微孔条上预包被黄曲霉毒素M1抗原,样本中黄曲霉毒素M1和此抗原竞争黄曲霉毒素M1抗体,同时黄曲霉毒素M1抗体与酶标二抗相结合,经TMB底物显色,样本吸光值与其含有的黄曲霉毒素M1成负相关,与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数,即可得出样品中黄曲霉毒素M1的含量。
黄曲霉毒素M1(AFM1)ELISA检测试剂盒
三、适用范围
可定性、定量检测牛乳及其他乳制品等样本中的黄曲霉毒素M1。
四、使用单位需自备的设备及试剂
设备:
┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm
┅┅振荡器
┅┅离心机
┅┅天平:感量0.01g
┅┅微量移液器:单道 20ml~200ml、200ml~1000ml、多道 250ml
┅┅刻度移液管:25ml
┅┅洗耳球
┅┅三角瓶:100ml
┅┅聚苯乙烯离心管:10ml/50ml
试剂:
----去离子水
五、提供的材料与试剂
组份名称
酶标板
高浓度标准品(810ppb)
AFM1酶标物
AFM1抗试剂
底物液A液
底物液B液
终止液
浓缩洗涤液(10×)
AFM1浓缩样品/标品稀释液(4×) 注:试剂盒检测范围0.05ppb~4.05ppb
黄曲霉毒素M1(AFM1)ELISA检测试剂盒
六、溶液的配制
七、牛奶、奶粉前处理
八、检测步骤
测定前应须知:
1、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温(20~25℃)。
2、使用之后立即将所有试剂放回2~8℃。
3、在ELISA分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性,正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
4、在所有恒温孵育过程中,避免光线照射,用盖板膜封住微孔板。
5、黄曲霉毒素M1可致癌,应戴手套操作。
九、结果判定
结果判定有两种方法,粗略判定可用第1种方法,而定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与其所含黄曲霉毒素B1成负相关。
1、用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围(ppb)。假设样本1的吸光度值为0.659,样本2的吸光度值为1.525,标准液吸光度值分别是:0ppb为2.101;0.05ppb为1.738;0.15ppb为1.313;0.45ppb为0.831;1.35ppb为0.469;4.05ppb为0.262。则样本1的浓度范围是0.45ppb~1.35ppb;样本2的浓度范围是0.05ppb~0.15ppb 再乘以其对应的稀释倍数即可得出样本中黄曲霉毒素M1的浓度范围。
2、定量分析
十、检测方法灵敏度、准确度、精密度
试剂盒检测下限:
0.05ppb
回收率:
牛奶:90±15%
奶粉:85±15%
精密度:
试剂盒的变异系数均小于10%
十一、注意事项
1、室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温(20~25℃)会导致所有标准的OD值偏低。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3、每加一种试剂前需将其摇匀。
4、反应终止液为2M硫酸,避免接触皮肤。
5、不要使用过了有效日期的试剂盒;也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂,掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低;不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6、储存条件
保存试剂盒于2~8℃,不要冷冻,将不用的酶标板微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下。
7、试剂变质的迹象
发色试剂有任何颜色表明发色剂变质,应当弃之。0标准的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)时,表示试剂可能变质。
8、在加入底物液A液和底物液B液后,一般显色时间为15~20min即可。若颜色较浅,可延长反应时间到30min(或更长)。反之,则减短反应时间。
9、浓缩洗涤液如有结晶属正常现象,请加热溶解后使用。
10、该试剂盒*反应温度为25℃,温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。
十二、贮藏条件及保存期
贮藏条件:保存试剂盒于2~8℃。
保存期:该产品有效期为12个月。
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