外周血染色体培养同步化操作方案

一、培養製備
1: 在室温或37±2℃的温度下解冻外周血染色体同步化套装培养管或培养瓶。
2: 在无菌条件下添加0.5ml全血至一个试管中或分配5ml瓶装的介质到一个细胞培养瓶中并加入样本。
3: 盖上培养管的盖子。
4: 混合培养管（或培养瓶）中的物质，水平放置（在它的平坦的表面上），并在37±2℃的温度下温育。没有必要添加CO2, 因为该介质的构成就是为关闭系统中*的淋巴细胞扩散而设计的。

二、培養同步化
1: 经过48-72小时的培养后，添加0.1ml的溶液A并温育一整夜。
2: 温育后，添加0.1ml的溶液B并温育5小时（没有必要洗涤细胞）。
3: 添加20ul秋水仙素（10ug/ml），并在37±2℃的温度下温育60分钟（大约）。如果要获得更多数量的前中期分裂相，那可将温育时间减少至15分钟。

注意：经过同步化处理的细胞，进行G和R显带时，胰酶处理时间需要相应延长。

三、染色體固定和玻片製備
1: 温育后，如有必要，将培养转移至一个试管，并用离心机分离3-4分钟，转速为每分钟2.000（更快的转速不会损坏细胞）。
2: 倒掉上层清液，注意不要使细胞粒子松散（推荐留大约0.5ml的物质在试管内）。
3: 有力地重新悬挂粒子。
4: 添加5ml低渗液（滴入H2O、0.56%氯化钾），并充分混合。
5: 在室温下至少温育7分钟。
6: 用离心机分离3-4分钟，转速为每分钟2.000。
7: 根据步骤2倒掉上层清液。
8: 有力地重新悬挂粒子。
9: 添加5ml Ibraimov溶液（滴入H2O、5%醋酸），并充分混合。
10: 立即用离心机分离3-4分钟，转速为每分钟2.000。
11: 根据步骤2倒掉上层清液。
12: 有力地重新悬挂粒子。
13: 添加5ml固定液（甲醇:醋酸：3:1），并充分混合。
14: 重复步骤10-13。
15: 立即用离心机分离3-4分钟，转速为每分钟2.000。
16: 仔细倒掉几乎全部的上层清液。
17: 添加几滴新准备的固定剂，要考虑到滴数应当适合粒子内的细胞浓度。
18: 滴一小滴细胞悬浮液到一块干净且湿润的显微镜玻片上。
19: 放进Optichrome染色体分散仪（貨號: EKAMH950）内，在正确温度和相对湿度的恒定条件下蒸发。