RT-PCR反应体系酶的选择

RT-PCR反应体系酶的选择

反转录酶的选择：
1． Money 鼠白血病病毒（MMLV）反转录酶：有强的聚合酶活性，RNA酶H活性相对较弱。zui适作用温度为37℃。! Z  T3 Z: v% Y$ P* ?
2． 禽成髓细胞瘤病毒（AMV）反转录酶：有强的聚合酶活性和RNA酶H活性。zui适作用温度为42℃。） F# O8 W9 A% O
3． Thermus thermophilus、Thermus flavus等嗜热微生物的热稳定性反转录酶：在Mn2+存在下，允许高温反转录RNA，以消除RNA模板的二级结构。
4． MMLV反转录酶的RNase H-突变体：Invitrogen公司商品名为SuperScript 和SuperScriptⅡ。此种酶较其它酶能多将更大部分的RNA转换成cDNA，这一特性允许从含二级结构的、低温反转录很困难的mRNA模板合成较长cDNA。
扩增酶的选择:
1． 对于小于4kb的产物使用Taq DNA聚合酶或Platinum Taq DNA聚合酶。' o1 U3 |8 F* C$ B
2． 对于小于12kb的产物使用Platinum Pfx Taq DNA聚合酶或Platinum Taq DNA Polymerase High Fidelity。
3． 对于大于12kb的产物使用ELONGAE或Enzyme Mix。
4． 对于一步法RT-PCR，如果产物小于3.5kb，使用Taq DNA聚合酶或Platinum Taq DNA聚合酶；如果产物小于9kb，使用Platinum Taq DNA Polymerase High Fidelity。