使用TNF试剂盒的检测原理及注意事项

　注意事项:

　　1.tnf试剂盒请保存在2～8℃。

　　2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶，请水浴加热使结晶*溶解后再配制工作液。

　　3.若标准品复溶后，请在三天内用完。

　　4.底物请勿接触氧化剂和金属。

　　5.加样时，请及时更换枪头，避免交叉污染。

　　6.严禁混用不同批号的试剂盒组份。

　　7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要，在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀。

　　8.室温反应，请严格控制在25～28℃。

　　9.洗涤过程是至关重要的，洗涤不充分会使度下降并导致结果误差较大。

　　10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔。

　　11.加样过程中避免气泡的产生。

　　12.血清和血浆标本的检测时，检测抗体的孵育时间应适当延长。

TNF试剂盒的检测原理及使用注意
检测原理: TNF试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中TNF-α的浓度。TNF-α捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的TNF-α会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗人TNF-α抗体后，抗人TNF-α抗体与TNF-α接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。zui后加入显色剂，若样本中存在TNF-α将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，TNF-α浓度与OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中TNF-α浓度。