免疫组化步骤

免疫组化步骤

1，切片，烤片60℃，1h；

2，脱蜡及复水ELISA试剂盒

二甲苯10min，100％乙醇5min，95％乙醇5min，90％乙醇5min，85％乙醇5min，80％乙醇5min， 75％乙醇5min，60％乙醇5min，50％乙醇5min，30％乙醇5min，自来水1min，双氧水1min；

3，1份30％H2O2加10份蒸馏水，室温10min，蒸馏水洗3次，每次3min；

4，微波修复

将切片浸入0.01M枸橼酸缓冲液，微波中zui大火力（98℃-100℃）加热至沸腾，冷却（约5-10min），反复两次；ELISA试剂盒

5，将切片自然冷却至室温，PBS洗涤3次，每次5min；

6，封闭，5％BSA，室温20min，甩去多余液体；

7，滴加一抗，37℃，1h，或者4℃过夜；

8，PBS洗涤3次，每次3min；

9，滴加二抗，37℃，15-30min；

10，PBS洗涤3次，每次3min；

11，滴加SABC，37℃， 30min；

12，PBS洗涤3次，每次5min；

13，1ml蒸馏水中分别滴加显色剂，混匀；

14，DAB显色剂配置好后，滴加于切片，室温，镜下检测反应时间（约5min）；

15，自来水冲洗干净，过蒸馏水；

16，苏木素复染2min，自来水冲洗；

17，脱水

30％乙醇3min，50％乙醇3min，70％乙醇3min，80％乙醇3min，90％乙醇3min，95％乙醇3min，100％乙醇3min，二甲苯20min；ELISA试剂盒

18，树胶封片，镜检。