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上海信帆为大家详述关于ELISA试剂盒的构成以及测定步骤
2014-2-11 阅读(2075)
ELISA试剂盒拥有稳定的重复性和可靠，是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。下面以96T的为例来给大家介绍关于ELISA试剂盒的构成以及测定步骤：
试剂盒组成
| 1 | 30 倍浓缩洗涤 | 20ml×1 瓶 | 7 | 终止液 | 6ml×1 瓶 |
| 2 | 酶标试剂 | 6ml×1 | 8 | 标准品（32ng/ml） | 0.5ml×1 瓶 |
| 3 | 酶标包被板 | 12 孔×8 条 | 9 | 标准品稀释液 | 1.5ml×1 瓶 |
| 4 | 样品稀释液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 说明书 | 1 份 |
| 5 | 显色剂A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封板膜 | 2 张 |
| 6 | 显色剂B 液 | 6ml×1 瓶 | 12 | 密封袋 | 1 个 |
完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：
(1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);
(2)酶标记的抗原或抗体(结合物);
(3)酶的底物;
(4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中)，参考标准品和控制血清(定量测定中);
(5)结合物及标本的稀释液;
(6)洗涤液，在板式ELISA中，常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水;
(7)酶反应终止液，常用的HRP反应终止液为硫酸，其浓度按加量及比色液的zui终体积而异，在板式ELISA中一般采用2mol/L。
测定步骤
1.加样
1. 除包被外都需45度加样
2.加样体积要准确
3.管底加样，不能加在管壁上
4.加样时不能产生气泡
2.温浴
1.加标本后和加结合物后，应立即放入按规定的反应温 度的水浴箱。
2.各ELISA板不应叠在一起。
3.为避免蒸发，板上应加盖，或将板平放在底部垫有湿 纱布的金属湿盒中。
4.加入底物后，反应的时间和温度通常不做严格要求。 如室温高于20℃，ELISA板可避光放在实验台上，以便 不时观察，待对照管显色适当时，即可终止酶反应。
3.洗涤
1.洗涤在ELISA过程中不是反应步骤，但却 是决定实验成败的关键。
2.目的是洗去反应液中没有与固相抗原或 抗体结合的物质以及在反应过程中非特 异性吸附于固相载体的干扰物质。
4.读板
1.阴性对照颜色极浅，在定性测定中一般 可采用目视比色。
2.如用酶标仪测定结果，准确性决定于 ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质 量和软件的算法。
上海信帆专业代理销售ELISA试剂盒，提供技术指导，售后服务！如果你有不清楚的地方，欢迎大家来电来函！我们一定竭诚为大家提供的服务！
