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细胞成活率形态学观察法及检测法
2015-12-1 阅读(1294)
细胞成活率，判断之形态学观察法：
细胞内出现颗粒或空泡。
细胞内如果出现颗粒物质，表明细胞处于非健康状态。
同样，细胞内出现空泡也说明细胞处于非健康状态。
细胞丧失双折射性：
如果发生在单层细胞：一个具有双折射性的正常细胞逐步失去这一特征（相差显微镜下细胞边缘成晕环），则提示该细胞已经死亡，即zui终干枯死亡。
如果发生在悬浮细胞：正常悬浮细胞清晰透明，如胞内出现颗粒或变浑浊表明细胞受损，甚至死亡。
怎样去除死细胞？单层培养的细胞死亡后，一般会漂浮起来，因此不需要特殊处理。
而悬浮细胞或原代培养细胞则要通过密度离心（如Ficoll梯度）方法收集死细胞。
细胞成活率检测实验
即刻检测实验——染料柜染实验：
原理——萘黑、台盼蓝以及很多其他染料均不能透过活细胞。概要——将细胞悬液与染料混匀，在低倍显微镜下检查。材料包括无菌材料,即细胞；生长液；0.25%胰酶；PBSA.非灭菌材料即：血细胞计数板；生存力染料；巴斯德吸管；显微镜；手执计数器。操作步骤：
1、用胰蛋白酶消化或离心，重悬制备高深度的细胞悬液
2、取一块干净的血细胞计数板，将盖玻片固定在适当位置上。
3、将一<滴细胞悬液和一滴（台盼蓝）或四滴（萘黑）染料混匀/li>
4、加至血细胞计数板的计数室中。
5、静置1~2min（但不要放置很久，否则活细胞会受到损伤而吸收染料）。
6、将计数板置于显微镜下，用10倍物境找到计数网格。
7、计数细胞总及着色细胞的数目。
8、清洗血细胞计数板，放入盒内。
实验分析-计算未着色细胞的百分数，该数字即为本方法所得出的细胞生存力百分数。
据统计，原代培养细胞成活率一般为50%~90%。细胞系一般为90%~100%存活。冻融细胞一般为50%~80%存活
