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内源性过氧化物酶阻断剂的使用范围
2025-4-7 阅读(81)
内源性过氧化物酶阻断剂是用于免疫组织化学（IHC）实验中的一种试剂，主要用于阻断组织样本中内源性过氧化物酶的活性，以避免其在后续染色步骤中产生非特异性信号，影响实验结果。
作用机制
内源性过氧化物酶（如辣根过氧化物酶，HRP）在某些组织（如红细胞、白细胞、肝脏和肾脏）中天然存在。在IHC实验中，使用HRP标记的二抗进行显色反应时，这些内源性酶会与底物反应，导致背景染色增强，干扰目标蛋白的特异性检测。阻断剂通过抑制内源性过氧化物酶的活性，减少非特异性信号。
常用阻断剂
过氧化氢（H₂O₂）：
常用浓度为0.3%-3%，溶于甲醇或水。
通过氧化作用抑制内源性过氧化物酶活性。
处理时间通常为10-30分钟。
叠氮钠（NaN₃）：
常用浓度为0.1%-1%。
通过抑制酶活性来阻断内源性过氧化物酶。
处理时间通常为10-30分钟。
甲醇-H₂O₂溶液：
甲醇与H₂O₂混合，常用比例为0.3% H₂O₂溶于甲醇。
同时阻断内源性过氧化物酶和部分内源性生物素。
使用步骤
组织切片脱蜡、水化。
用阻断剂（如3% H₂O₂）孵育10-30分钟。
用缓冲液（如PBS）清洗切片，去除残留阻断剂。
进行后续IHC染色步骤。
注意事项
浓度与时间：阻断剂浓度过高或时间过长可能破坏组织抗原。
组织类型：不同组织内源性过氧化物酶含量不同，需优化条件。
试剂选择：根据实验需求选择合适的阻断剂。
