当前位置:上海纪宁实业有限公司>>公司动态>>ELISA试剂盒符合以下要求
在ELISA试剂盒中,常用的酶为辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)和碱性磷酸酶(alkaline phosohatase, AP)。在少数商品ELISA试剂盒中,应用的酶尚有葡萄糖氧化酶、β-D-半乳糖苷酶和脲酶等。
国产ELISA试剂盒一般都用HRP制备结合物。HRP是一种糖蛋白,含糖量约为18%,分子量为44000,是一种复合酶,由主酶(酶蛋白)和辅基(亚铁血红素)结合而成,是一种卟啉蛋白质。主酶无色糖蛋白在275nm波长处有zui高吸收峰,辅基是深棕色的含铁卟啉环,在403nm波长处有zui高吸收峰。HRP的纯度用RZ(Reinheit Zahl,德文,意为纯度数)表示,是403nm的吸光度与280nm吸光度之比,高纯度的HRP的RZ≥7.0。
HRP除符合上述的ELISA试剂盒中标记酶的要求外,更有价格低廉和性质较稳定的特点。值得注意的是,在选用酶制剂时,除其纯度RZ外,更应注意酶的活力。高纯度的酶如保存不当,活力也会降低。酶制剂的活力以所含的酶活力单位表示,可用对底物作用后生成产物量的测定进行试验。
国外很多ELISA试剂盒采用碱性磷酸酶(AP)作为标记酶。常用的AP有两个来源,分别从大肠杆菌和小牛肠膜中提取。不同来源的酶生化特性特性略不相同,从大肠杆菌中提取的AP分子量为80000,酶作用的pH为8.0;用小牛肠膜中提取的AP分子量为100000,zui适pH为9.6。在ELISA试剂盒中,AP系统的敏感度一般高于HRP系统,空白值也较低,但AP价格昂贵,制备结合物所得率也较HRP低。
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