当前位置：上海纪宁实业有限公司>>公司动态>>双抗体夹心法是检测抗原方法操作步骤如下
根据同样原理，将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物，ELISA试剂盒即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。在一步法测定中，应注意钩状效应，ELISA试剂盒类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象。当标本中待测抗原浓度相当高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，ELISA试剂盒而不再形成夹心复合物，ELISA试剂盒所得结果将低于实际含量。钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果。
（一）双抗体夹心法
（1）将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。
（2）加受检标本：ELISA试剂盒使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，ELISA试剂盒形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。
（3）加酶标抗体：ELISA试剂盒使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。ELISA试剂盒*洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。
（4）加底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。ELISA试剂盒根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。
（二）双位点一步法
在双抗体夹心法测定抗原时，ELISA试剂盒如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体，则在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步（图15-5）。这种双位点一步不但简化了操作，缩短了反应时间，如应用高亲和力的单克隆抗体，ELISA试剂盒测定的敏感性和特异性也显著提高。单克隆抗体的应用使测定抗原的ELISA提高到新水平。
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