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在ELISA试剂盒中一般有两次抗原抗体反应,即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间,这一保温过程称为温育,有人称之为孵育,在ELISA试剂盒中似不恰当。 一般均采用水浴,可将ELISA试剂盒板置于水浴箱中,ELISA板底应贴着水面,使温度迅速平衡。为避免蒸发,板上应加盖,也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔,此时可让反应板漂浮在水面上。
若用保温箱,ELISA试剂盒应放在湿盒内,湿盒要选用传热性良好的材料如金属等,在盒底垫湿的纱布,后将ELISA板放在湿纱布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规定的温度,特别是在气温较低的时候更应如此。ELISA试剂盒总需要时间来保温,是因为ELISA属固相免疫测定,抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。
以抗体包被的夹心法为例,加入板孔中的标本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的机会,只有贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐步平衡的过程,因此需经扩散才能达到反应的终点。
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