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推荐抗体纯化的方法

阅读:764发布时间:2011-06-22

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        纯化抗体通常用于直接检测抗原。此时抗体标记有一个易于鉴定的标记物,用于结合和检测所研究的抗原。在间接检测抗原方法中,一抗不被标记,而是用标记的二抗(一种抗免疫球蛋白抗体)来检测。一般而言,建议使用间接法。因为许多商家能够提供可靠的标记二抗,用间接法不仅省力,结果同样可靠。尽管如此,有几种方法需要标记的一级抗体。例如,在免疫染色试验中,需要研究2个或2个以上抗原的相对位置时,常需要纯化抗体并用不同标记物标记,这样能比较它们的相对位置。此时使用间接法不合适。因为间接法是用标记二抗来给未标记的一抗定位。又如,有时一抗需要标记,而该样本中又有大量无关抗体,它们能干扰对一抗的检测,此时用间接法也不合适。用鼠源性单抗对鼠组织抗原进行定位时,也会出现这种情况。

          尽管纯化抗体的方法较多,建议用蛋白A或蛋白G微球纯化法作为zui常用的方法。这种方法效率高,能为常用的实验方法提供足够纯化的抗体,而且随着商品化的蛋白A和蛋白G基质的出现,能将任何来源的抗体纯化。抗体的纯化也可采用传统的色谱法,在某些情况下非常有用。这些方法包括DEAE离子交换色谱法、硫酸铵沉淀法及其他方法。但是用蛋白G或蛋白A亲和柱法纯化较其他方法简单,并且纯化效果是其他方法的数倍。因此在所有方法中,我们推荐这种方法。


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