检测范围： 96T
15pg/ml-400pg/ml
使用目的：
本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中P 糖蛋白(P-gp)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠P 糖蛋白(P-gp)水平。用纯化的大鼠P 糖蛋
白(P-gp)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入P 糖蛋白(P-gp)，再与HRP 标记的P 糖蛋白(P-gp)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的P 糖蛋白(P-gp)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠P 糖蛋白(P-gp)浓度。
试剂盒组成
1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶7终止液6ml×1瓶
2 酶标试剂6ml×1瓶8标准品（800pg/ml）0.5ml×1瓶
3 酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液 1.5ml×1瓶
4 样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份
5 显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张
6 显色剂B液6ml×1/瓶1密封袋1个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
400pg/ml5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
200pg/ml4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
100pg/ml3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
50pg/ml2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
25pg/ml号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。
