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大鼠尿素氮ELISA试剂盒操作步骤

阅读:336发布时间:2014-05-07

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    上海科兴商贸有限公司

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    162B

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    WORD 文档

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操作步骤

  1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

3200pmol/L

5号标准品

150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

1600pmol/L

4号标准品

150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液

800pmol/L

3号标准品

150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液

400pmol/L

2号标准品

150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液

200pmol/L

1号标准品

150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

 

 

  1. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
  2. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  
  3. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
  4. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  5. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
  6. 温育:操作同3。
  7. 洗涤:操作同5。
  8. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
  9. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
  10. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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