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上海科兴商贸有限公司
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阅读:414发布时间:2014-12-11
植物组织蛋白质提取方中三氯醋酸—丙酮沉淀法:
1、在液氮中研磨叶片
2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜,然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清。
3、加入等体积的冰浴丙酮(含0.07%的β-巯基乙醇),摇匀后离心(4℃8000rpm以上1小时),然后真空干燥沉淀,备用。
4、上样前加入裂解液,室温放置30分钟,使蛋白充分溶于裂解液中,然后离心(15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准),可临时保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白,然后可分装放入-80℃备用。
三氯醋酸—丙酮沉淀法主要针对双向电泳,杂质少,离子浓度小的特点,当然单向电泳也同样适用,只是电泳的条带会减少。
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