高活力蛋清*制备
1材料与方法
1.1材料与仪器
1.1.1材料鲜鸡蛋,市售;溶壁微球菌,购于*微生物研究所;标准*(;20000/)购于公司;阳离子交换树脂,选用南开化工厂724型树脂;其他试剂均为分析纯.
1.1.2仪器722型分光光度计,上海棱光技术有限公司提供;自动柱层析仪,瑞典产;喷雾干燥器,瑞士产;凝胶成像分析系统,美国产.1.2检测方法
1.2.1*活力的测定详见文献『81.1.2.2酶蛋白含量的测定酶蛋白含量采用一酚法9】=914定.
1.2.3*纯度的测定*纯度采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定,并用凝胶成像系统软件进行数据的采集和分析.
1.3*提取工艺流程鲜蛋一预处理一搅拌吸附一上柱洗脱一等电点沉淀一透析一喷雾干燥一成品.
1.4操作要点
(1)预处理.将新鲜鸡蛋洗净,破壳,收集蛋清,过铜筛,除杂物,慢速搅拌均匀.
(2)搅拌吸附.将蛋清和树脂按照一定比例混匀,进行搅拌吸附.
(3)洗脱.树脂蛋清分离后,用蒸馏水充分清洗树脂,进行动态洗脱,收集洗脱液备用.
(4)等电点沉淀.将洗脱液的值调节至0.5,在4下静置,待沉淀*后,离心收集沉淀得粗酶.将粗酶调节至一定浓度备用.
(5)透析.将酶液透析过夜.
(6)喷雾干燥.固定出风温度,以不同的进风温度进行喷雾干燥.2结果与分析2.1搅拌吸附条件的优化搅拌吸附是制备*的重要工序,直接影响到酶收率和酶活力.采用单因素试验设计确定搅拌吸附阶段中蛋清与树脂的比例和搅拌时间.
