2016年3月8号星期五，我司销售部业务员王接到来自广西医科大学的刘同学的咨询来电，刘同学不久后将面临论文答辩。刘同学导师给予她一个月完成人2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)ELISA的实验。但由于之前没有接触过该实验，对于ELISA实验如何作标准曲线图表示很茫然。在了解到该情况后，吴让我司技术部发来关于做标准曲线图的详细相关介绍供刘同学参考。在此也希望能够帮助到遇到同样有这个问题的客户。以下是关于ELISA实验标准曲线图的注意事项及拟合方程的选择：
1、样品的浓度等指标是根据标准曲线计算出来的，所以首先要把做标准曲线看作是比做正式实验还要重要的一件事，否则后面的实验结果无从谈起。
2、设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度，并且要能涵盖你所要检测实验样品的浓度，即样品的浓度要在标准曲线浓度范围之内，包括上限和下限。而对于呈S型的标准曲线，尽量要使实验样品的浓度在中间坡度zui陡段，即曲线几乎成直线的范围内。
3、采用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度，这样就能够保证标准样品的浓度不会出现较大的偏离。
4、检测标准样品时，应按浓度递增顺序进行，以减少高浓度对低浓度的影响，提高准确性。
5、标准曲线的样品数一般为7个点，但至少要保证有5个点。
6、做出的标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动，但一般来说，相关系数R至少要大于0.98，对于有些实验，至少要0.99甚至是0.999.
标准曲线图的拟合方程
在S曲线的低浓度部门可以用乘幂方程很好的拟合，中低浓度部门可以用直线方程，中间部门可用对数方程，而中后段可用四参数。免疫检测时尺度点（可以是倍比稀释的，也可以不是）浓度假如和相应的吸光度（OD）值假如能够呈现直线关系当然是的了，这时可以通过EXELL等利便的获得拟合曲线，进而推算出样品的浓度值。
关于尺度曲线的拟合方式，直线、二次曲线、三次曲线、指数、对数等虽都可用于ELISA及其它生物学反应中的曲线拟合，但都只合用于曲线的一部分，有的合用于前半段，有的合用于后半段，有的合用于中间一段，而Logistic曲线则对曲线的全部都有较好的合用性。在一个长的区间内，Logistic应该都能拟合得较为理想。假如用来定量，S形曲线的中间段（较陡处）是比较好的，而两真个平坦部门计算误差会大，有时甚至会很大。用于免疫检测的所谓“尺度曲线”实在称为拟合曲线比较合适。目前上zui流行的免疫检测拟合方式是“四参数逻辑拟合”，用这种拟合方式往往能够比较的反映浓度和吸光度的曲线关系，从而进一步比较准确的获得样品中待测物质的浓度值。但我们做免疫检测很少有时候能够有这么理想的情况，标品浓度和相应OD值往往是"S"型的曲线关系，这时就不能用直线拟合的方式了，而对拟合方法进行选择就是必要的了。
