ELISA试剂盒利用抗原抗体特异性结合的特点，可分为直接法、间接法、双抗体夹心法、竞争法等。针对间接法，我公司技术员做出了*经验讲谈：
*、方阵ELISA
1.用途：
① 融合前后确定鼠血清中抗体效价；
② 拿到单抗腹水后，需要建立ELISA方法时首先要确定包被原及抗体的*工作浓度。
经典的方阵ELISA：将抗原和抗体各自稀释成不同梯度浓度，结果OD值P/N>2的均判为阳性，选取OD值在1.0左右的那个Ag-Ab浓度为*工作浓度，其主要原因与酶标仪灵敏度有关。
但是，对于抗原抗体而言，由于它们被稀释成不同浓度，那么在理论上，每个抗原稀释度情况下，总有一个抗体的稀释度其OD值在1.0左右，那么到底选取哪一个OD值1.0左右的好呢？这就需要同时用药物做个抑制来看，哪个浓度下抑制情况好，就取哪个抗原抗体浓度做工作浓度。
第二、间接竞争ELISA
在用方阵ELISA确定好抗原抗体*结合浓度后就可以做间接竞争ELISA了，其目的主要是考察抗体的特异性、绘制标准曲线，计算抗体对抗原的半数抑制、检测限等参数，也可以用来检测未知样品中的抗体。方法是用确定的抗原包被，在加一抗时同时加入不同浓度的标准品，然后加二抗，显色。用药物(即标准品)浓度的对数为横坐标、抑制率为纵坐标，绘制ELISA标准曲线，计算相关的参数，之后就可以将未知的样品所测OD值代入曲线方程求其中抗体的含量。通常这是建立ELISA检测方法的*项目。
标准曲线可以绘成直线或是曲线(二次方程或三次方程)。通常是选取线性比较好的几个点绘成直线。直线斜率越高说明抗体的特异性及灵敏性好，R2值越靠近1，则说明线性关系好。曲线绘好后，有一些常用的参数，如抑制率、半数抑制、检测限、定量限、标准偏差、变异系数等等：
1.抑制率(%)＝1－B/B0(B0为不含药物的OD值；B为含有药物的OD值)
2.标准差(SD)＝[∑(Xi－B)2/(n－1)]1/2；
3.标准偏差(RSD)＝SD/B
半数抑制：指用药物(半抗原)去做竞争实验时呈现50%抑制效果时的药物浓度。药物浓度越低，而抑制率越高，则表示抗体对药物的特异性越好，灵敏度也高。
半数抑制浓度IC50对应的OD值：OD IC50＝0.5 B0
检测下限(LOD)对应的OD值：ODLOD=B0－3SD；
定量限(LOQ)对应的OD值：ODLOQ=B0－10SD
第三、间接ELISA操作中具体注意的问题
间接ELISA一般有6个步骤：包被抗原、封闭、加一抗(在做竞争时同时加入药物)、加二抗、显色、终止。其中除了加显色和终止外，其余步骤之间都要进行洗板。在这里面，每一步都非常重要，假如有一步疏忽都会造成ELISA试剂盒结果的不准确。通常ELISA结果会出现如空白显色、阴性偏高、方阵梯度不明显，还有如何提高间接竞争ELISA灵敏度等问题。
