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小鼠转化生长因子β1(TGF-β1)酶联免疫分析书

阅读:109发布时间:2014-10-14

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    研域(上海)化学试剂有限公司

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小鼠ELISA试剂盒样本处理及要求:

1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.

7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

小鼠ELISA试剂盒操作步骤:

1.         标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在*、第二孔中分别加标准品100μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为180ng/L,120ng/L ,60ng/L,30ng/L, 15ng/L)。

2.         加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.         温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.         配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。

5.         洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.         加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7.         温育:操作同3。

8.         洗涤:操作同5。

9.         显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

10.     终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.     测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

 

小鼠ELISA试剂盒注意事项:

1.  试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.  浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.  各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,*使用排枪加样。

4.  请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔*孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.  底物请避光保存。

7.  严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.  所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.  本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

E-(Mu)(05)-00060 小鼠白介素2可溶性受体α链(IL-2sRα/CD25)ELISA检测试剂盒 ,英文名: soluble interleukin-2 receptor,IL-2sRα ELISA Kit  ,规格: 96T/48T
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E-(Mu)(05)-00062 小鼠白介素1α(IL-1α )ELISA检测试剂盒 ,英文名: Interleukin 1α,IL-1α ELISA Kit  ,规格: 96T/48T
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E-(Mu)(05)-00064 小鼠白介素1可溶性受体Ⅰ(IL-1sRⅠ)ELISA检测试剂盒 ,英文名: soluble interleukin-1 receptor Ⅰ,IL-1sRⅠ ELISA Kit  ,规格: 96T/48T
E-(Mu)(05)-00065 小鼠白介素16(IL-16)ELISA检测试剂盒 ,英文名: Interleukin 16,IL-16 ELISA Kit  ,规格: 96T/48T
E-(Mu)(05)-00066 小鼠白介素13(IL-13)ELISA检测试剂盒 ,英文名: Interleukin 13,IL-13 ELISA Kit  ,规格: 96T/48T
E-(Mu)(05)-00067 小鼠白介素12(IL-12/P70)ELISA检测试剂盒 ,英文名: Interleukin 12,IL-12/P70 ELISA Kit  ,规格: 96T/48T
E-(Mu)(05)-00068 小鼠白介素12(IL-12/P40)ELISA检测试剂盒 ,英文名: Interleukin 12,IL-12/P40 ELISA Kit  ,规格: 96T/48T
E-(Mu)(05)-00069 小鼠白介素11(IL-11)ELISA检测试剂盒 ,英文名: Interleukin 11,IL-11 ELISA Kit  ,规格: 96T/48T
E-(Mu)(05)-00070 小鼠白介素10(IL-10)ELISA检测试剂盒  ,英文名: Interleukin 10,IL-10 ELISA Kit  ,规格: 96T/48T
E-(Mu)(05)-00071 小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)ELISA检测试剂盒 ,英文名: insulin-like growth factors binding protein 4,IGFBP-4 ELISA Kit  ,规格: 96T/48T


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