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智立中特(武汉)生物科技有限公司
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H4人神经胶质瘤细胞
种属:人
别称:H-4
组织来源:脑组织
疾病神经胶质瘤
传代比例/细胞消化1:2传代,消化1-2分钟
完quan培养基配置DMEM培养基;10%胎牛血清;1%双抗
简介该细胞源自一位37岁神经胶质瘤白人男性患者
形态上皮细胞样
生长特征贴壁生长
倍增时间每周2至3次
STR
Amelogenin:X,Y CSF1PO:10,12 D13S317:12 D16S539:11,12 D5S818:10,12 D7S820:8,11 THO1:7,9
TPOX:8,11 vWA:14,18
培养条件气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
冻存条件冻存液:90%FBS,DMSO 10%,
保藏机构ATCC;HTB-148
产品使用仅xian于科学研究,不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。
H4人神经胶质瘤细胞传代操作步骤:
一、贴壁细胞传代
1.提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热,用75%酒精擦拭后再放入超净台内。
2.吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液,加少量PBS润洗细胞。
3.加入适量胰mei,使胰mei的量能盖住细胞,37℃孵育,每隔2~3min显微镜下观察,待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰mei,加入新鲜培养基,晃动细胞瓶,终止胰nei作用。
4.H4人神经胶质瘤细胞用吸管小心吹打贴壁的细胞,制成细胞悬液。控制吹打的力度,避免产生大量的气泡。
5.将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养,隔天观察贴壁生长情况。
二、悬浮细胞传代
1.将细胞悬液转移到无菌离心管内,1000rpm离心5min。
2.弃去上清,加入新鲜的培养基,用吸管小心吹散沉淀,制成细胞悬液。
3.将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养。
H4人神经胶质瘤细胞培养的过程中,经常见到黑色的颗粒或小黑点,这种情况是怎么引起的呢?该怎么避免呢?原因:
黑点,大概有细胞本身带的,环境有的,还有人身上带进细胞间的,还有就是血清和培养基
1、如果小黑点有增殖趋势,那么就有可能是污染了,需要处理;
2、如果小黑点没有增殖趋势,且不影响细胞生长,也不影响实验的话,则可能
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a、是“黑胶虫",黑胶虫究竟是一种生物还是非生物,本身就存在争议。有人认为是从血清中来的一种原虫,也有人认为是细菌,或是真菌,也有人认为是血清中的蛋白的结晶。“黑胶虫"可寄生于动物细胞,也可以生存于培养基中,依靠H4人神经胶质瘤细胞和培养基中的营养为生,并随细胞传代而传代。“黑胶虫"与细胞竞争性生长,开始时对细胞并没有什么影响,但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候,细胞生长就会受到影响直至死亡,严重影响了科研活动的开展和进行。以前(这个至少是10年以前),很多实验室在养细胞时用国产血清,那时的血清可能质量不过关,有所谓的“黑胶虫",但是也没有明确的鉴定。但是现在的血清,即使国产的,产品里这种现象就少见了。
b、是细胞碎片,或血清里德沉淀析出,在做布朗运动。
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