土壤几丁质酶试剂盒-微量法 返回列表页

土壤几丁质酶试剂盒-微量法注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨)， 以及真菌类的细胞壁中，而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解，具有抵御真菌侵染的作用，成为抗真菌病害的研究热点。

测定原理

几丁质酶水解几丁质产生 N-乙酰氨基葡萄糖，进一步与对二甲氨基苯/甲醛产生红色化合物，在 544nm 处有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。

自备实验用品及仪器

天平、水浴锅、离心机、震荡仪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板，甲苯、

蒸馏水。

土壤几丁质酶试剂盒-微量法试剂组成和配制

试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 4mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体 65mL×1 瓶，4℃避光保存。

样品处理

新鲜土样风干，过 30-50 目筛。

土壤几丁质酶试剂盒-微量法测定操作表

计算公式

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y=5.2714x-0.0007，R2=0.9989；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值 ΔA。 酶活性定义：37℃条件下，每克土壤每天分解几丁质产生 1μg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。

土壤几丁质酶活性（μg/d/g 土样）=（ΔA +0.0007）÷5.2714×V 反总÷W÷T×1000

= 598×（ΔA +0.0007）

V 反总：反应体系总体积，0.315mL；W：样本质量，0.1g；T：反应时间，1d；1000：

1mg/mL=1000μg/mL

b.用 96 孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y=2.6357x-0.0007，R2=0.9989；x 为标准品浓度（μg/mL），y 为吸光值 ΔA。

酶活性定义：37℃条件下，每克土壤每天分解几丁质产生 1μg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。

土壤几丁质酶活性（μg/d/g 土样）=（ΔA +0.0007）÷2.6357×V 反总÷W÷T×1000

= 1195×（ΔA +0.0007）

V 反总：反应体系总体积，0.315mL；W：样本质量，0.1g；T：反应时间，1d；1000：

1mg/mL=1000μg/mL

土壤几丁质酶试剂盒-微量法注意事项

1． 试剂一充分混匀后再使用。