土壤亚硝酸还原酶试剂盒-微量法 返回列表页

土壤亚硝酸还原酶试剂盒-微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

土壤亚硝酸还原酶是反硝化作用中的关键酶之一，参与亚硝酸盐至 NO 的还原反应，它的活性反映了生物降解过程中氮素的转化效率，为氮素转化规律的研究提供一定的依据。

测定原理：

亚硝酸还原酶可将 NO2—还原为 NO，使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的 NO2—减少，即 540nm 处吸光值的变化可反应土壤中亚硝酸还原酶的活性。

土壤亚硝酸还原酶试剂盒-微量法自备实验用品及仪器：

天平、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、水浴锅、低温离心机。

试剂的组成和配制：

试剂一：液体 4mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加 4mL 蒸馏水溶解。

试剂三：液体 4mL×1 瓶，4℃保存。（如出现沉淀可以 70-80℃加热溶解）

试剂四：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。（如出现沉淀可以 70-80℃加热溶解） 试剂五：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。

工作液：临用前根据用量将试剂四和试剂五以 1:1 的比例混合。

土壤亚硝酸还原酶试剂盒-微量法样品处理：

新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干，过 30~50 目筛。

测定操作表：

计算公式：

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y = 1.5562x+ 0.0088，R2 = 0.996；x 为标准品浓度（μ  mol/mL），y 为吸光值（A标准管-A 空白管）。

酶活单位定义：每g 土样每天还原 1μ mol NO2ˉ 的量为一个酶活力单位。

S-NiR（μ mol /d /g 土样）=[A 空白管-(A 测定管-A 对照管) -0.0088]÷1.5562×V 标÷W÷T

= 0.617×[A 空白管-(A 测定管-A 对照管) -0.0088]÷W

T：反应时间，1h=1/24d；V 标：标准液体积，0.04mL；W：样本质量，g。

b.使用 96 孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y = 0.7781x+ 0.0088，R2 = 0.996；x 为标准品浓度（μ  mol/mL），y 为吸光值（A标准管-A 空白管）。

酶活单位定义：每g 土样每天还原 1μ mol NO2ˉ 的量为一个酶活力单位。

S-NiR（μ mol /d /g 土样）=[A 空白管-(A 测定管-A 对照管) -0.0088]÷0.7781×V 标÷W÷T

= 1.234×[A 空白管-(A 测定管-A 对照管) -0.0088]÷W

T：反应时间，1h=1/24d；V 标：标准液体积，0.04mL； W：样本质量，g。

土壤亚硝酸还原酶试剂盒-微量法注意事项：

1.配制好的工作液 3 天内使用完。

2.若吸光值超过 1.5，将上清液进行适当的稀释后再加入工作液显色，并在计算公式中乘以稀释倍数。

3.严格控制显色时间，否则会对结果有影响。

4.标准曲线线性范围为 0.03μ mol/mL-1.5μ mol/mL。

5.A 空白管-（A 测定管-A 对照管）线性范围为 0.02-1.5。