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规格 | 50T/100T | 仪器 | 分光光度计/酶标仪 |
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运输 | 常温/2-8℃ | 保质期 | 三个月 |
品牌 | 合肥莱尔生物科技有限公司 | 订购方式 | 联系客服 |
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脯氨酸(PRO)含量测试盒微量检测试剂盒说明书,正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
Pro 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,逆境条件下,植物体内 Pro 含量显著增加。Pro 增加量在一定程度上反映了抗逆性,抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此, 脯氨酸增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。
测定原理:
用磺基水杨酸(SA)提取 Pro,加热处理后,Pro 与酸性茚三酮溶液反应生成红色;加甲苯萃取后,在 520nm 测定吸光度。
自备实验用品及仪器:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、冰乙酸 25mL、甲苯 50mL、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:冰乙酸 25 mL×1 瓶, 4℃保存。(自备)
试剂二:液体 25 mL×1 瓶, 4℃保存。
试剂三:jia苯 50mL×1 瓶,4℃保存。(自备)
脯氨酸(PRO)含量测试盒样品测定的准备:
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声3s,间隔 10s,重复 30 次);之后置 90℃ 振荡提取 10min;10000g,25℃离心 10min,取上清,冷却后待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆;之后置 90℃振荡提取 10min;10000g,25℃离心 10min,取上清, 冷却后待测。
2、血清(浆)样品:按照血清(浆)体积(mL):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议取
0.1mL 血清(浆)加入 1mL 提取液),充分混匀,之后置 90℃浴振荡提取 10 分钟,10000g,25℃ 离心 10 分钟,取上清,冷却后待测。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 520nm,蒸馏水调零。
2、样本测定:
(1) 取 0.25mL 样本+0.25mL 试剂一+0.25mL 试剂二 于有盖 EP 管中,置沸水浴中保温 30min(盖紧,防止水分散失),每10min 振荡一次。
(2) 待冷却后,加入 0.5mL 试剂三,振荡 30s,静置片刻,使色素转至试剂三中;吸取 0.2mL 上层溶液于微量石英比色皿或96 孔板中,于 520nm 波长处比色,记录吸光值A。
Pro 含量计算:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、典型回归方程y = 0.0521x - 0.0021 (x 为脯氨酸含量,μ g/mL;y 为吸光值A)
2、按照血清(浆)体积计算
Pro 含量(μ g/mL)=[(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(V3×V1÷V2)=192×(A+0.0021)
3、按照蛋白浓度计算
Pro 含量(μ g/mg prot)=[(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(V1×Cpr)=19.2×(A+0.0021)÷Cpr
4、按照样本质量计算
Pro 含量(µg/g 鲜重)= [(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(W×V1÷V2)=19.2×(A+0.0021) ÷W
脯氨酸(PRO)含量测试盒5、按照细菌或细胞密度计算
Pro 含量(μ g/104 cell)=[(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0384×(A+0.0021)
V1:加入反应体系中样本体积,0.25mL;V2:加入提取液体积,1 mL;V3:加入血清(浆) 体积,0.1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
1、典型回归方程y = 0.02605x - 0.0021 (x 为脯氨酸含量,μ g/mL;y 为吸光值A)
2、按照血清(浆)体积计算
Pro 含量(μ g/mL)=[(A+0.0021) ÷0.02605×V1]÷(V3×V1÷V2)=384×(A+0.0021)
3、按照蛋白浓度计算
Pro 含量(μ g/mg prot)=[(A+0.0021) ÷0.02605×V1]÷(V1×Cpr)=38.4×(A+0.0021)÷Cpr
4、按照样本质量计算
Pro 含量(µg/g 鲜重)= [(A+0.0021) ÷0.02605×V1]÷(W×V1÷V2)=38.4×(A+0.0021) ÷W
3、按照细菌或细胞密度计算
Pro 含量(μ g/104 cell)=[(A+0.0021) ÷0.02605×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0769×(A+0.0021)
V1:加入反应体系中样本体积,0.25mL;V2:加入提取液体积,1 mL;V3:加入血清(浆) 体积,0.1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。
脯氨酸(PRO)含量测试盒注意:检测限为 1μ g/mL。
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