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规格 | 50T/100T | 仪器 | 分光光度计/酶标仪 |
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运输 | 常温/2-8℃ | 保质期 | 三个月 |
品牌 | 合肥莱尔生物科技有限公司 | 订购方式 | 联系客服 |
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半胱氨酸(Cys)检测试剂盒测定意义:蛋白质含有三种含硫氨基酸:甲硫氨酸、胱氨酸和 Cys。其中,Cys 是一种含有巯基的含硫氨基酸,从甲硫氨酸转化而来,并且可与胱氨酸互相转化。Cys 参与蛋白质二硫键的形成,经常是蛋白质活性中心的组成部分,还可以为其它生理生化反应提供巯基。此外,Cys 大量积聚在皮肤和粘膜表面,在角蛋白生成中维持重要的巯基酶的活性,并且补充巯基,以维持皮肤的正常代谢,调节表皮最下层的色素细胞生成的底层黑色素。具有美白、解毒、改善炎症和过敏性皮肤等作用。
测定原理:
Cys 还原磷钨酸生成钨蓝,在 600nm 处有吸收峰;通过 600nm 吸光度,计算 Cys 含量。自备实验用品及仪器:
低温离心机、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、磷酸和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存。用前 1 天,向试剂三中加 2.5mL 蒸馏水充分溶解,再加磷酸0.625mL,混匀后盖紧(防止水分散失)沸水浴 2h;冷却后加 10mL 蒸馏水, 4℃可保存2 周。
标准品:液体×1 瓶,1μ mol/mL 标准液,4℃保存。
半胱氨酸(Cys)检测试剂盒半胱氨酸提取:
1、液体样品中半胱氨酸提取:取 0.1mL 液体样品,加试剂一 0.9mL,充分混匀,8000g
4℃离心 10min,取上清液,待测。
2、组织中半胱氨酸提取:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆,8000g 4℃离心 10 min,取上清液待测。
3、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
测定操作:
1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min,调节波长到 600 nm,蒸馏水调零。
2. 空白管:取微量石英比色皿/96 孔板,加入 20μ L 蒸馏水,100μ L 试剂二,100μ L 试剂三, 混匀后室温静置 15 min,于 600nm 处测定吸光值,记为A 空白管。
3. 标准管:取微量石英比色皿/96 孔板,加入 20μ L 标准液,100μ L 试剂二,100μ L 试剂三, 混匀后室温静置 15 min,于 600nm 处测定吸光值,记为A 标准管。
4. 测定管:取微量石英比色皿/96 孔板,加入 20μ L 上清液,100μ L 试剂二,100μ L 试剂三, 混匀后室温静置 15 min,于 600nm 处测定吸光值,记为A 测定管。
注意:空白管和标准管只需要做一次。
计算公式:
半胱氨酸(Cys)检测试剂盒a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1. 按液体样品的体积计算:
半胱氨酸含量(μ mol/mL)=[C 标准品×V 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×(V 样总÷V 样)=1×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)
2. 按样本质量计算:
半胱氨酸含量(μ mol/g 鲜重)=[C 标准品×V 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×(V 样总÷V 样)÷W=1×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷W
3. 按照蛋白浓度计算:
半胱氨酸含量(μ mol /mg prot)= [C 标准品×V 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管
-A 空白管)]÷(V 样×Cpr)=1×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷Cpr
4. 按细胞数量计算:
氨基酸含量(μ mol /104 cell)=[C 标准品×V 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)] ×(V 样总÷V 样×细胞数量)=1×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷ 细胞数量
C 标准品:标准品浓度,1 μ mol/mL;V 标准品:反应体系中加入标准品体积,0.02mL;V 样: 反应体系中加入样品提取液体积,0.02 mL;V 样总:样品提取液,1mL;W:样品质量,g。b.使用 96 孔板测定的计算公式如下
1. 按液体样品的体积计算:
半胱氨酸含量(μ mol/mL)=[C 标准品×V 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×(V 样总÷V 样)=1×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)
2. 按质量计算:
半胱氨酸含量(μ mol/g 鲜重)=[C 标准品×V 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×(V 样总÷V 样)÷W=1×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷W
3. 按照蛋白浓度计算:
半胱氨酸含量(μ mol /mg prot)= [C 标准品×V 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管
-A 空白管)]÷(V 样×Cpr)=1×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷Cpr
4. 按细胞数量计算:
氨基酸含量(μ mol /104 cell)=[C 标准品×V 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)] ×(V 样总÷V 样×细胞数量)=1×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷ 细胞数量
半胱氨酸(Cys)检测试剂盒C 标准品:标准品浓度,1 μ mol/mL;V 标准品:反应体系中加入标准品体积,0.02mL;V 样: 反应体系中加入样品提取液体积,0.02 mL;V 样总:样品提取液,1mL;W:样品质量,g。
注意事项:检出限为 100μ mol/L。
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