谷丙转氨酶（ALT/GPT）检测试剂盒 返回列表页

 谷丙转氨酶（ALT/GPT）检测试剂盒微量法说明书

注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

货号：YX-W-A900

规格：100T/48S

产品内容：

提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 3.5 mL×1 瓶，4℃保存； 

试剂二：液体 3.5 mL×1 瓶，4℃保存； 

试剂三：液体 30 mL×1 瓶，4℃保存；

标准品：液体 1mL×1 支，20µmol/mL 丙酮酸钠标准品，4℃保存。

产品说明：

GPT（EC 2.6.1.2）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化氨基酸和酮酸转氨基反应，在氨基酸代谢中具有重要作用。此外，哺乳动物肝细胞 GPT 活性很高，当肝细胞坏死，GPT 释放到血液中，血清 GPT 活性显著增高。因此，GPT 被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。

GPT 催化丙氨酸和α-酮戊二酸发生转氨基反应，生成丙酮酸和谷氨酸；加入 2,4-二硝ji苯肼溶液，不仅终止上述反应，而且与酮酸中的羰基加成，生成丙酮酸苯腙；苯腙在碱性条件下呈红棕色，可以在 505nm 读取吸光值并计算酶活力。

谷丙转氨酶（ALT/GPT）检测试剂盒试验中所需的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样品测定的准备

1、 细胞或细菌的制备 ：

先收集细胞或细菌样品到离心管内，弃上清，按照每 500 万细胞或细菌加入 1mL 提取液，超声波破碎细胞或细菌（功率 20％，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）。3500g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进冰浴行匀浆。3500g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）样品：直接检测。

谷丙转氨酶（ALT/GPT）检测试剂盒二、测定步骤

1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 505nm，蒸馏水调零。

2、 标准曲线的测定

首先将标准品稀释至 2µmol/mL，按下表混合标准品和试剂一得到浓度梯度标准管：

3、 在 EP 管或在 96 孔板中加入下列试剂

混匀后，37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）预热 30min

混匀后，37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）准确反应 20min

混匀，室温放置 10min，在 505nm 波长处测各管吸光度。注:0µmol/mL 标准管为空白管。

谷丙转氨酶（ALT/GPT）检测试剂盒三、计算

1、标准曲线的绘制：

以各标准溶液浓度为 x 轴，以∆A（A 标准管-A 空白管）为 y 轴做标准曲线，得到方程 y=kx+b。将（A 测定管-A 对照管）带入方程求 x 值。

2、GPT 活性计算：

（1） 按样本鲜重计算：

单位定义：每小时每 g 样品催化产生 1µmol 丙酮酸的量为一个 GPT 活力单位。

GPT（U/g 鲜重）=x×（V 样本+V 试剂一）÷（W×V 样本÷V 样总）÷T=12x÷W。

（2） 按样本蛋白浓度计算：

单位定义：每小时每 mg 组织蛋白催化产生 1µmol 丙酮酸的量为一个 GPT 活力单位。

GPT（U/mg prot）=x×（V 样本+V 试剂一）÷（Cpr×V 样本）÷T=12x÷Cpr。

（3） 按血清（浆）体积计算：

单位定义：每小时每 mL 血清（浆）样品催化产生 1µmol 丙酮酸的量为一个 GPT 活力单位。

GPT（U/mL）=x×（V 样本+V 试剂一）÷V 样本÷T=12x。

（4） 按细胞或细菌数量计算：

单位定义：每小时每 104 个细胞或细菌催化产生 1µmol 丙酮酸的量为一个 GPT 活力单位。

GPT（U/104 cell）=x×（V 样本+V 试剂一）÷（500×V 样本÷V 样总）÷T=0.024x。

V 样本：样本体积，0.005mL；V 试剂一：试剂一体积，0.025mL；V 样总：提取液体积，1mL；W：样本鲜重，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；T：反应时间，0.5h；500：细胞或细菌总数，万