乳酸脱氢酶（LDH）检测试剂盒 返回列表页

 乳酸脱氢酶（LDH）检测试剂盒说明书可见分光光度法

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

货号：YX-C-A001

规格：50T/24S

产品内容：

提取液：30mL×1 瓶， 4℃保存；

试剂一：液体 15 mL×1 瓶， 4℃保存；

试剂二：粉剂×1 支，-20℃保存，用时加入 1.3 mL 双蒸水充分溶解备用，配好后-20 ℃保存，可保存两周，禁止反复冻融；

试剂三：液体 15 mL×1 瓶，4℃保存；

试剂四：液体 50 mL×1 瓶，4℃保存；

产品简介：

LDH（EC 1.1.1.27）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途径的末端酶，催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应，伴随着 NAD+/NADH 之间互变。

LDH 催化 NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸进一步与 2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。

乳酸脱氢酶（LDH）检测试剂盒试验中所需的仪器和试剂：

可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

 操作步骤：

一、样品测定的准备：

细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积

（mL）为 500-1000:1  的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次），8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为 1:5-10  的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

 血清（浆）样品：直接检测。

二、测定操作：

1.分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 450nm，蒸馏水调零。

2.样本测定（在 EP 管中加入下列试剂）

充分混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 15min

乳酸脱氢酶（LDH）检测试剂盒充分混匀，室温静置 3min，450 nm 下测定吸光度，计算ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管需要设一个对照管。

LDH 活力单位计算：
1. 标准条件下测定的回归曲线， y = 0.725x (x 为标准品浓度，μmol/mL；y 为对吸光度)。
2. 血清（浆）LDH 活力的计算
单位的定义：每 mL 血清（浆）每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（U/mL）=ΔA÷0.725÷T×103=92×ΔA
3. 细胞、细菌和组织中 LDH 活力的计算
（1） 按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1 nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（U/mg prot）=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (V1×Cpr) ÷T×103 =92×ΔA÷Cpr
需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
（2） 按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（U/g 鲜重）=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (W ×V1÷V2) ÷T×103 =92×ΔA÷W
（3） 按细菌或细胞密度计算：
乳酸脱氢酶（LDH）检测试剂盒单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（U/104 cell）= [ΔA÷0.725×V 1]÷(500 ×V1÷V2) ÷T×103 =0.184×ΔA÷W
V1：加入反应体系中样本的体积，0.05 mL；V2：加入提取液的体积，1 mL； T：反应时间，15 min；Cpr： 蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g; 500：细胞或细菌总数，500  万