蔗糖酶检测试剂盒 返回列表页

蔗糖酶检测试剂盒注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

产品内容:

提取液:液体50mLx1瓶，4℃保存；

试剂一:液体3mLx1瓶，4℃保存；

试剂二:粉剂x1支，4℃保存，用时加入2mL蒸馏水充分溶解;用不完的试剂4℃可保存一周；

试剂三:液体3mLx1瓶，常温保存；

标准品:粉剂x1支，4℃保存，用时加入lml蒸馏水充分溶解,制备10mg/mL葡萄糖标准溶液待用；用不完的试剂4℃保存一周。

产品说明:

蔗糖酶(EC 3.2.1.26)是碳水化合物消化吸收的关键酶之一，能够水解蔗糖变成相应的单糖而被机体吸收。

本试剂盒采用3.5-二硝基水杨酸法测定蔗糖酶催化产生的还原糖的含量，由此可得出蔗糖酶水解速度。其原理是3.5-二硝基水杨酸与还原糖共热被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内还原糖的量和反应液的颜色深度成正比。此法操作简便、迅速、杂质干扰较小。

蔗糖酶检测试剂盒试验中所需的仪器和试剂:

可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、可调式移液器、玻璃微量比色皿/96孔板、冰和蒸馏水。

操作步骤:
一、样品测定的准备:

1. 样品的准备:

按照组织质量(g) :提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织，加入lmL提取液)，进行冰浴匀浆。8000g4C离心10min,取上清，置冰上待测。

2. 标准品的制备:

将标准品用蒸馏水稀释至3、2、1.5、1、0.5、0.25、0mg/mL(0mg/mL 为空白管)绘制标准曲线。

二、加样表和测定步骤:

蔗糖酶检测试剂盒混匀，540nm蒸馏水调零，测定各管吸光值，ΔA=A 测定-A对照，每个测定管设一个对照管。标准曲线的建立:以标准品的浓度为x轴，540nm下的吸光度(ΔA标准=A标准管-A空白管)为y轴，绘制标准曲线。

三、蔗糖酶活力计算:

1、根据标准曲线，将△A(y)带入公式中计算出x值(mg/mL) 

2、按照蛋白浓度计算

单位定义:每mg组织蛋白每分钟催化水解lug蔗糖定义为一个酶活力单位。

蔗糖酶活力(ug/min/mg prot）=(1000×x×V1)÷(V1×Cpr)÷T=100×x÷Cpr

3、按样本鲜重计算

单位定义:每g组织每分钟催化水解1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。

蔗糖酶活力(ug/min/g鲜重)=(1000×x×V1)÷(V1×W)÷T=100×x÷W

蔗糖酶检测试剂盒1000: 1mg/mL=1000ug/mL: V1：加入反应体系中样本体积，0.1mL； V2：加入提取液体积，1mL；T:反应时间，10min； Cpr:样本蛋白质浓度，mg/mL； W:样本鲜重，g。