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| 规格 | 50T/100T | 仪器 | 分光光度计/酶标仪 |
|---|---|---|---|
| 运输 | 常温/2-8℃ | 保质期 | 三个月 |
| 品牌 | 合肥莱尔生物科技有限公司 | 订购方式 | 联系客服 |
| 保存 | 详情见说明书 | 货期 | 现货 |
脱氢酶(pDHA)检测试剂盒微量法说明书，注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
生物体的脱氢酶(Plant dehydrogenase , DHA)的活性在很大程度上反映了生物体的活性状态，能直接表示生物细胞对其基质降解能力的强弱。
测定原理：
受氢体 2,3,5-氯化三苯基四氮唑（2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride，即TTC）在细胞呼吸过程中接受氢以后，其还原产物三苯基甲鐟（Triphenyl Formazone，即TF）呈现红色，在波长485nm处有最大吸收峰，测定其485nm吸光值，即得植物脱氢酶活性。
自备实验用品及仪器：
恒温培养箱或水浴锅、低温离心机、研钵、滤纸、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、冰、蒸馏水和乙酸乙酯。
试剂的组成和配制：
试剂一：粉剂×1瓶，使用前加少量水溶解，定容至50mL，避光、4℃保存（尽量现配现用）。
试剂二：液体 100mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：乙酸乙酯，自备。
脱氢酶(pDHA)检测试剂盒样品处理：
称取0.1g的植物组织，用双蒸水清洗3-4次，用滤纸吸干水分，备用。
测定步骤和操作表：
1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至485nm，蒸馏水调零。
2、操作表
| 对照管 | 测定管 |
样品（g） | 0.1 | 0.1 |
试剂一（mL） |
| 1 |
试剂二（mL） | 2 | 1 |
充分混匀，37℃，暗培养 3h，取出后立即冰浴 5min，过滤，去滤液，尽量用滤纸吸干样品， 置于研钵中。 | ||
试剂三（mL） | 1 | 1 |
充分研磨，吸取红色液体于离心管中，用少量试剂三冲洗研钵，一起加入离心管，用试剂三 定容至 2mL，10000rpm，4℃，离心 5min，取上清，于微量石英比色皿/96 孔板，测定 485nm 处测定管和对照管吸光值。Δ A=A 测定-A 对照 | ||
脱氢酶(pDHA)检测试剂盒脱氢酶活力计算：
酶活单位定义：在37℃时，每小时每克样品使反应体系OD值每增加0.01为一个酶活单位。计算公式：脱氢酶活性（U/g.h）=Δ A÷0.01÷W÷T
=300×Δ A÷W
T：反应时间，3h；W：样品质量，g。
注意事项：
1. 配制好的试剂一避光保存于 4℃，尽量在一周内使用，若出现红色，则不能使用。
2. 试剂三易挥发，有毒，为了您的健康，请穿实验服，戴kou罩，戴乳胶手套操作。
3. 反应完成后立即冰浴以终止反应，并去除干净残留的反应液。
4. 如果测定出来的吸光值较大，需把样品适当稀释再进行测定。
脱氢酶(pDHA)检测试剂盒5. 试剂盒 2-8℃保存。
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